[發明專利]一種簡單便捷測定蛋白酶活力的方法在審
| 申請號： | 201910730740.3 | 申請日： | 2019-08-08 |
| 公開（公告）號： | CN110305934A | 公開（公告）日： | 2019-10-08 |
| 發明（設計）人： | 路福平;劉逸寒;李玉;曹雪;李家霖;劉夫鋒;張會圖;王洪彬;彭沖 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12Q1/37 | 分類號： | C12Q1/37;C07K5/103 |
| 代理公司： | 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 郭曉迪 |
| 地址： | 300457 天津市濱*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蛋白酶活力 蛋白酶 蛋白酶水解 對硝基苯胺 寡肽化合物 樣品需求量 蛋白酶液 底物溶液 過程操作 酶活測定 樣品測定 肽鍵斷裂 緩沖液 酪氨酸 酶活力 吸收峰 底物 寡肽 吸光 肽鍵 配制 耗時 | ||
【權利要求書】：
1.一種測定蛋白酶活力的方法，其特征在于，所述方法是利用一種寡肽化合物Suc-Ala-Ala-Pro-Tyr-pNA作為底物，配制該底物溶液與緩沖液、蛋白酶液組成的反應體系，水解反應后測定OD410的吸光值，可得蛋白酶的酶活力。
2.如權利要求1所述一種測定蛋白酶活力的方法，其特征在于，所述方法主要包括如下步驟：
1)用DMSO配制4mM的AAPY底物溶液；
2)反應體系組成：按照溶液體積，8份緩沖液，2份AAPY底物溶液，10份稀釋后蛋白酶液；
3)混合均勻，40℃靜置反應10min，測定OD410時的吸光值；
4)以硝基苯胺標準溶液的濃度和OD410吸光值繪制標準曲線，根據標準曲線計算得到所測定樣品酶液中的酶活力。
3.如權利要求1或2所述一種測定蛋白酶活力的方法，其特征在于，所述稀釋后蛋白酶液的酶活在3U/mL-4U/mL。
4.如權利要求1或2所述一種測定蛋白酶活力的方法，其特征在于，所述緩沖液為pH7.5的磷酸鹽緩沖液；或pH 2.0的乳酸-乳酸鈉緩沖液；或pH 10.5的硼砂-氫氧化鈉緩沖液。
5.如權利要求1或2所述一種測定蛋白酶活力的方法，其特征在于，所述蛋白酶包括但不限于中性蛋白酶、酸性蛋白酶或堿性蛋白酶。
6.一種寡肽化合物Suc-Ala-Ala-Pro-Tyr-pNA。
7.權利要求6所述化合物作為底物用于檢測蛋白酶活力的用途。
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