[發明專利]基于檢測五個SNP位點區分常見小鼠近交系的PCR分析引物及其分析方法

有效

• 申請號: 201910730410.4
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN110305974B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 徐鳳姣;閔凡貴;王靜;張鈺
• 申請（專利權）人: 廣東省實驗動物監測所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市科豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

本發明提供了一種基于檢測五個SNP位點區分常見小鼠近交系的PCR分析引物及其分析方法，旨在提供一種穩定、快速、高效檢測五個SNP位點區分常見小鼠近交系的引物及其方法；其SNP1檢測引物為P1、P2和P3，核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO：3所示；SNP2檢測引物為P4、P5和P6，核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4?6所示；SNP3檢測引物為P7、P8和P9，核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7?9所示；SNP4檢測引物為P10、P11和P12，核苷酸序列如SEQ?ID?NO：10?12所示；SNP5檢測引物為P13、P14和P15，核苷酸序列如SEQ?ID?NO：13?15所示；屬于實驗動物的遺傳檢測領域。

技術領域

本發明屬于實驗動物的遺傳檢測領域，具體涉及一種基于檢測五個SNP位點區分常見小鼠近交系的PCR分析引物，本發明還涉及基于檢測五個SNP位點區分常見小鼠近交系的PCR分析方法。

背景技術

近交系小鼠具有同基因性、長期遺傳穩定性、均一性、個體性、背景資料和數據較完善等特點，是近代醫學和生物學實驗中應用最為廣泛的實驗動物之一，其遺傳質量直接影響到動物實驗的準確性、重復性和科學性。定期對其進行遺傳監測是保證其遺傳質量的重要措施，國家實驗動物管理條例也規定每年至少要對近交系動物監測一次。

傳統的小鼠遺傳檢測方法有形態學方法(毛色基因測試法、下領骨測試法)，免疫學方法(皮膚移植法、混合淋巴細胞培養發、腫瘤移植法、血清反應法等)，統計學方法(監測生長發育、繁殖等數量性狀)，生物化學方法(監測生化基因標記)和細胞遺傳學方法(監測染色體帶型)。隨著一系列分子遺傳標記的發現，產生了分子生物學檢測方法，應用于實驗動物遺傳檢測，主要基于限制性片段長度多態性(Restriction?fragment?lengthpolymorphism，RFLP)、隨機引物多態性(Random?amplified?polymorphic?DNA，RAPD)、微衛星(Microsatellite)和DNA指紋(DNA?Fingerprints)等。盡管這些方法各有特點優勢，但是由于有的操作復雜，成本高昂，不適合大規模基因研究，未能得到推廣應用。

近年來，第三代分子標記SNP(single?nucleotide?polymorphism)技術也被用于近交系小鼠遺傳質量檢測。與傳統的遺傳檢測方法相比，SNP檢測方法具有以下優點：①對于生物化學法和免疫學方法很難鑒別的一些同基因型和同源品系也能鑒別；②SNP方法準備工作簡單容易、快速；③與SSLP(Simple?sequence?length?polymorphism)檢測方法相比，SNP方法速度快，效率高，同時可以檢測多個動物和多個位點；④不需處死動物，所有基因純度在他們產生下一代之前就可以得到保證；⑤SNP檢測法能實現高通量、自動化和低成本，滿足開展大規模檢測的要求。

近年來隨著小鼠數據庫的建立，SNP技術也被用于近交系小鼠遺傳質量檢測，如動態兩管等位基因特異PCR、TaqMan、Invader、Amplifuor、單管雙向等位基因專一性擴增(single-tube?bi-directional?allele?specific?amplification，SB-ASA)等，這些新方法雖各具優點，但都只能對單一SNP位點進行檢測，費時費力，較難實現對大量樣本的快速檢測，從而制約了這些技術的廣泛應用。這些新方法雖各具優點，但穩定性不足，成本也相對較高。

現基于競爭性等位基因特異性PCR(Kompetitive?Allele?Specific?PCR，KASP)，建立了一個穩定、快速、高效的SNP檢測平臺，實現對近交系小鼠品系的快速鑒定，以滿足不斷發展的生命科學對其遺傳品質越來越高的要求。

發明內容

針對上述問題，本發明的第一個目的是提供一種能快速鑒定近交系小鼠品系的引物。

本發明的第二個目的是提供一種了穩定、快速、高效檢測五個SNP位點區分常見小鼠近交系的方法。

為此，本發明提供的第一個技術方案是這樣的：