[發(fā)明專利]基于檢測五個SNP位點(diǎn)區(qū)分常見小鼠近交系的PCR分析引物及其分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910730410.4
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN110305974B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐鳳姣;閔凡貴;王靜;張鈺
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省實(shí)驗(yàn)動物監(jiān)測所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市科豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44467
• 代理人: 王海曼

1.一種基于檢測五個SNP位點(diǎn)區(qū)分小鼠近交系的PCR分析引物，其特征在于，所述的五個SNP位點(diǎn)分別為SNP1、SNP2、SNP3、SNP4、SNP5，每個SNP位點(diǎn)對應(yīng)的引物如下所示：

SNP1檢測引物為P1、P2和P3，引物P1核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，引物P2核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示，引物P3核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；

SNP2檢測引物為P4、P5和P6，引物P4核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示，引物P5SEQ?IDNO：5所示，引物P6核苷酸序列如SEQ?ID?NO：6所示；

SNP3檢測引物為P7、P8和P9，引物P7核苷酸序列如SEQ?ID?NO：7所示，引物P8核苷酸序列如SEQ?ID?NO：8所示，引物P9核苷酸序列如SEQ?ID?NO：9所示；

SNP4檢測引物為P10、P11和P12，引物P10核苷酸序列如SEQ?ID?NO：10所示，引物P11核苷酸序列如SEQ?ID?NO：11所示，?引物P12核苷酸序列如SEQ?ID?NO：12所示；

SNP5檢測引物為P13、P14和P15，引物P13核苷酸序列如SEQ?ID?NO：13所示，引物P14核苷酸序列如SEQ?ID?NO：14所示，引物P15核苷酸序列如SEQ?ID?NO：15所示。

2.一種基于檢測五個SNP位點(diǎn)區(qū)分小鼠近交系的分析方法，其特征在于，依次包括下述步驟：

步驟1）提取C57BL/6J、615、CBA/CaJ、CBA/J、DBA/1J、DBA/2J、C3H/HeJ、129P3/J、FVB/NJ、NOD/LtJ、BALB/c、NU/J、TA1品系的小鼠基因組；

步驟2）以步驟1）提取的小鼠基因組為模板，用權(quán)利要求1所述的引物對所述五個SNP位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

步驟3）對步驟2）擴(kuò)增后PCR產(chǎn)物讀取反應(yīng)后熒光，進(jìn)行SNP分型，分型判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：

；

步驟1）中提取不同品系的小鼠基因組的方法是搜集不同品系的鼠尾，用天根的組織基因組DNA提取試劑盒提取基因組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于檢測五個SNP位點(diǎn)區(qū)分小鼠近交系的分析方法，其特征在于，步驟2）所述的PCR擴(kuò)增方法為：針對每個SNP位點(diǎn)，分別配置PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系，并于ABI7500上讀取反應(yīng)前熒光；然后按照如下條件進(jìn)行擴(kuò)增：

1）94℃，?15分鐘，循環(huán)1次；

2）94℃，20秒，61-55℃，60秒，每次循環(huán)降落0.6℃，循環(huán)10次；

3）94℃，20秒，55℃，60秒，循環(huán)26次；

4）94℃，20秒，57℃，60秒，循環(huán)12-18次。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基于檢測五個SNP位點(diǎn)區(qū)分小鼠近交系的分析方法，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：5μL基因組DNA，?5μL?KASP?master?mix，0.14μL對應(yīng)引物。