[發明專利]特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱及其制備方法

在審

• 申請號: 201910729947.9
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN110605104A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 呂海霞;朱熠門;謝增鴻
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: B01J20/285
• 分類號: B01J20/285;B01J20/30;B01D15/38;C07D311/76
• 代理公司: 35100 福州元創專利商標代理有限公司
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

本發明公開了特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體?印跡整體柱及其制備方法，屬于分析化學技術領域。所述的整體柱是以高親水2?丙烯酰胺?2?甲基丙磺酸為有機聚合單體、籠型低聚倍半多聚硅氧烷和丙烯酸酯為交聯劑、赭曲霉毒素A為模板、安息香雙甲醚為引發劑、N,N?二甲基甲酰胺和PEG 10000為二元致孔劑以及OTA核酸適配體為原料，通過發生自由基光引發聚合反應直接形成。該核酸適配體?印跡整體柱在啤酒基質中對赭曲霉毒素A的檢測回收率達到95.5%，為赭曲霉毒素A的特異性識別分離提供了新途徑。

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱及其制備方法。

背景技術

分子印跡是一種在合成聚合物中涉及到與目標分子的高結合行為和特異性識別位點的技術。所得分子印跡聚合物（MIPs）是通過在模板分子周圍聚合官能和交聯單體以形成共聚物而制備的。除去模板后，建立與靶分子互補的形狀、大小和功能的結合位點，并有利于模板分子與具有相似結構的其它化合物的再結合。MIPs具有良好的物理化學穩定性、特異性識別和低成本等優點,已被廣泛應用于分離過程、固相萃取（SPE）、微反應器、催化、抗體模擬、生物傳感器等領域。然而，現有MIPs的結合親和力相對較差。因此，對MIPs技術的應用還有很大的上升空間。

核酸適配體是一段通過SELEX方法篩選出的短鏈DNA或RNA序列，對靶分子具有高度的親和性和高度的特異性。將分子印跡技術和核酸適配體技術相結合能夠有效的提高分子印跡的選擇性和與目標分子的親和性。因此MIPs和核酸適配體的組合是生產具有改善的性質和期望特征的混合替代物的理想解決方案。特納（Adv. Mater. 2015, 27, 750?758）等人通過修飾DNA的化學結構開發了適體-MIP雜合納米顆粒（Apt-MIP NPs）。已經證明，引入這種修飾的“適體單體”導致所產生的MIP NP的親和力增加。除此之外，還開發了多種其他形式的適體-MIP雜交體用于傳感器檢測抗生素，小分子和蛋白質。但是到目前為止，還沒有利用Apt-MIP相結合的雙重識別技術制備整體柱的報道。

本發明將核酸適配體和MIPs兩種識別技術相結合，以高親水2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸為有機聚合單體、籠型低聚倍半多聚硅氧烷和丙烯酸酯為交聯劑、赭曲霉毒素A為模板、安息香雙甲醚為引發劑、N ,N-二甲基甲酰胺和PEG 10000為二元致孔劑和OTA核酸適配體為原料，溶解形成均一的溶液，注入柱內通過發生自由基光引發聚合反應直接形成，并應用于實際啤酒樣品中OTA的特異性分析和檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱及其制備方法。該整體柱骨架結構均勻，核酸適配體反應效率高，特異性識別能力強，負載量大，機械性能穩定，制備方法簡便快捷。是由通過“一步聚合”的方式，采用“巰基-烯”點擊化學反應，在分子印跡整體柱的制備中引入核酸適配體，利用柱內自由基光引發聚合反應制備了核酸適配體-印跡雙重識別的整體柱。所得到的核酸適配體-印跡整體柱能實現對目標物的高效識別，且對啤酒基質中目標物的回收率達95.5%。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱是以高親水有機聚合單體、交聯劑、模板、引發劑、二元致孔劑和核酸適配體為原料，通過發生自由基光引發聚合反應直接形成。

上述的高親水有機聚合單體為2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸單體；所述交聯劑為籠型低聚倍半多聚硅氧烷和丙烯酸酯；所述的模板為赭曲霉毒素A溶液；所述的引發劑為安息香雙甲醚；所述的二元致孔劑為N ,N-二甲基甲酰胺和PEG 10000；所述的核酸適配體為OTA核酸適配體5^，-SH-C6-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3^，。