[發明專利]特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱及其制備方法

在審

• 申請號: 201910729947.9
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN110605104A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 呂海霞;朱熠門;謝增鴻
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: B01J20/285
• 分類號: B01J20/285;B01J20/30;B01D15/38;C07D311/76
• 代理公司: 35100 福州元創專利商標代理有限公司
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

1.特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：所述核酸適配體-印跡整體柱以高親水有機聚合單體、交聯劑、模板、引發劑、二元致孔劑和OTA核酸適配體為原料，通過發生自由基光引發聚合反應直接形成。

2.根據權利要求1中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：所述的高親水有機聚合單體為2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸；所述交聯劑為籠型低聚倍半多聚硅氧烷和丙烯酸酯；有機聚合單體與交聯劑的質量比為：12.7~14.7 : 85.3~87.3。

3.根據權利要求2中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：所述籠型低聚倍半多聚硅氧烷為甲基丙烯酸酯接枝的多面體低聚倍半多聚硅氧烷，所述丙烯酸酯為乙二醇二甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸酯接枝的多面體低聚倍半多聚硅氧烷與乙二醇二甲基丙烯酸酯的質量比為：3.7~ 3.8 : 81 .6~83.5。

4.根據權利要求1中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：所述的二元致孔劑為N ,N-二甲基甲酰胺和PEG 10000，其組成按質量百分比計為：N ,N-二甲基甲酰胺95%，PEG 10000 5%。

5.根據權利要求1中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：二元致孔劑在高親水有機聚合單體、交聯劑和致孔劑三者總質量中所占質量百分比為80%-83%。

6.根據權利要求1中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：所述的引發劑為安息香雙甲醚，引發劑的用量為有機聚合單體、交聯劑、二元致孔劑和模板總量的1.7wt%-4.1wt%。

7.根據權利要求1中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱，其特征在于：所述的核酸適配體為OTA核酸適配體5^，-SH-C6-GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAG

CATCGGACA-3^，，核酸適配體的濃度為40 μmol/L-80 μmol/L。

8.一種如權利要求1所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）紫外光引發透明石英毛細管柱預處理：將紫外光引發透明石英毛細管分別用0.1mol/L HCl沖洗30 min，再用蒸餾水沖洗30分鐘，用0.1 mol/L NaOH沖洗3小時，用蒸餾水和甲醇分別沖洗30分鐘，然后在室溫下以0.4 MPa氮氣干燥30 min；為了將C=C鍵引入毛細管內表面以鍵合雜化基質，將體積為百分比50%的γ-MAPS甲醇溶液注入毛細管中，兩端用硅橡膠密封，然后將毛細管放在60 ℃的水浴鍋中水浴加熱24 h；之后，用甲醇沖洗毛細管30min，然后在70 ℃下以0 .4 MPa氮氣干燥30 min以供進一步使用；

（2）將500 ng/mL的模板赭曲霉毒素A（OTA）溶液和一定濃度的核酸適配體溶液在離心管中孵育30 min，再將高親水有機聚合單體、交聯劑、引發劑和與OTA孵育后的核酸適配體加入到離心管中，然后再將二元致孔劑加入至離心管中，室溫下渦旋振蕩20-30 min，超聲脫氣20-30 min，使其形成均勻的溶液；

（3）將步驟（2）得到的溶液在室溫下注入步驟（1）預處理好的紫外光引發透明石英毛細管柱中，兩端密封后快速放入波長365 nm紫外交聯儀進行光照反應，反應完成后將制備好的整體柱取出，連接至液相色譜溶劑高壓泵，依次采用乙酸:甲醇=1:9（v/v）、甲醇洗去模板和未反應的物質直至壓力穩定；

（4）將緩沖液通入步驟（3）所制得的整體柱中，于4 ℃溫度下保存。

9.如權利要求1中所述的特異性識別赭曲霉毒素A的核酸適配體-印跡整體柱在啤酒、葡萄酒、果汁飲品實際樣品中赭曲霉毒素A成分的分離和富集中的應用。