[發明專利]一種檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201910729444.1
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN110257526B
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 楊光;張亮
• 申請（專利權）人: 天津康博爾生物基因技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12Q1/6804
• 代理公司: 天津市君硯知識產權代理有限公司 12239
• 代理人: 何德俊

1.一種檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒，其特征在于，包括人GP5基因5’端甲基化特異性擴增反應液和側向流核酸檢測試紙；所述GP5基因5’端甲基化特異性擴增反應液包括甲基化DNA處理組分、GP5基因5’端甲基化特異性引物組、熱穩定性DNA聚合酶、UNG酶和反應緩沖液，所述側向流核酸檢測試紙包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜檢測區和吸水墊；所述GP5基因5’端甲基化特異性引物組包括上游GP5基因5’端甲基化特異性識別引物、上游通用擴增引物和下游基因特異性引物；所述上游GP5基因5’端甲基化特異性識別引物含有GCACATCCTGCTCTT的序列；且該序列的5’端連有接頭引物，該序列的3’端有修飾基團；所述上游通用擴增引物序列為：TTCCAAGCCTTCGCCACCTCCATC，所述下游基因特異性引物序列為：GCCGCGGCCCATTCCG；所述上游GP5基因5’端甲基化特異性識別引物5’端接頭引物為一“發卡結構”接頭，所述接頭序列為GTCGTATCCAGTGCTTCCAAGCCTTCGCCACCTCCATCGCACTGGATACGAC，所述特異性引物識別序列3’端修飾為LNA、磷酸化修飾、ddC或C3 Spacer中的任意一種。

2.根據權利要求1所述的檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒，其特征在于，所述甲基化DNA處理組分為亞硫酸鹽溶液或甲基化依賴性的限制內切酶；所述亞硫酸鹽溶液包括3-5M亞硫酸氫鈉、5%-10%乙二醇二甲醚和5-10mM氫醌；所述甲基化依賴性的限制內切酶為MteI、LpnPI、BlsI、GlaI、PcsI、KroI中的一種或幾種。

3.根據權利要求1所述的檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒，其特征在于，所述上游通用擴增引物的5′端標記地高辛、FITC、HEX、FAM或Cy5中的任意一種，所述下游基因特異性引物的5′端標記生物素。

4.根據權利要求1所述的檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒，其特征在于，所述結合墊噴涂有修飾的納米彩色乳膠微球，所述修飾為鏈酶親和素。

5.根據權利要求1所述的檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒，其特征在于，所述硝酸纖維素膜檢測區包括一條C線和兩條T線。

6.根據權利要求5所述的檢測GP5基因5’端甲基化的試劑盒，其特征在于，所述C線包被的是生物素-BSA，所述兩條T線分別包被的是地高辛抗體、FITC抗體、HEX抗體、FAM抗體、Cy5抗體中的任意一種，且兩條T線包被的抗體不同。