[發明專利]一種利用微生物發酵制備1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯的方法

有效

• 申請號: 201910728364.4
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN112342251B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 楊繼國;張林尚;楚美云;婁文勇
• 申請（專利權）人: 華南協同創新研究院
• 主分類號: C12P7/6472
• 分類號: C12P7/6472;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

1.一種利用微生物發酵制備1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯的方法，其特征在于，將渾濁紅球菌（Rhodococcus opacus）接入發酵培養基，進行發酵，得到發酵產物，離心，收集菌體，對菌體細胞壁進行破碎，收集油脂，得1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯；所述發酵培養基的碳源包括油酸乙酯、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯；所述渾濁紅球菌為渾濁紅球菌PD630（Rhodococcus opacus PD630）；所述油酸乙酯：棕櫚酸乙酯：亞油酸乙酯=1:(1~1.5):(1~2) (n/n/n)。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）種子培養：將渾濁紅球菌接入種子培養基中，進行活化，得到種子液；

（2）發酵培養：將步驟（1）所得種子液接種于發酵培養基中，培養得到發酵產物；

（3）凍干菌體：將發酵產物離心，用正己烷萃取除去培養基中油酸乙酯、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯殘渣，真空冷凍干燥得凍干菌體；

（4）收集油脂：向凍干菌體中，加入鹽酸和正己烷，振蕩混勻后進行沸水浴煮，邊煮邊振蕩，冷卻，離心，收集油脂層，將油脂層中的正己烷吹干，再烘干后，冷卻即得1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述碳源總添加量為0.5~10%（v/v）。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（1）中種子培養基為營養肉湯培養基；所述活化的條件為：活化溫度為28~32℃、轉速為100~250 r/min、活化時間為18~48h。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（2）中種子液的接種量為1~5%，培養溫度為28~32℃、轉速為100~250 r/min、培養時間為3~7天。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（3）中真空冷凍干燥的溫度為-20~-50℃，時間為15~48h。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟（4）中鹽酸濃度為3±2mol/L，正己烷用氮氣吹干，在烘箱中烘干，烘干溫度為65~80℃，烘干時間1~4h，所述冷卻在干燥器中進行。