[發明專利]一種利用微生物發酵制備1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯的方法

有效

• 申請號: 201910728364.4
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN112342251B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 楊繼國;張林尚;楚美云;婁文勇
• 申請（專利權）人: 華南協同創新研究院
• 主分類號: C12P7/6472
• 分類號: C12P7/6472;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

本發明公開了一種利用微生物發酵制備1?油酸?2?棕櫚酸?3?亞油酸甘油三酯的方法，將渾濁紅球菌(Rhodococcus opacus)接入發酵培養基，進行發酵，得到發酵產物，離心，收集菌體，對菌體細胞壁進行破碎，收集油脂，得1?油酸?2?棕櫚酸?3?亞油酸甘油三酯(OPL)；所述發酵培養基的碳源包括油酸乙酯、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯。該方法避免了OPL制備過程中原料昂貴、使用局限等問題，該方法過程簡單，只需要利用微生物發酵、微生物細胞壁破碎、提油就可以得到OPL油脂；培養基主要組成部分為水，成本低廉。所產油脂中具有的sn?2位棕櫚酸含量較高，能達到70.86％。

技術領域

本發明涉及母乳脂肪替代品領域，具體涉及到一種發酵制備1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯的方法。

背景技術

脂肪是嬰兒配方奶粉的重要配料。人乳脂是人乳中主要營養物質之一，其不僅可提供嬰兒所需能量的45％左右，而且可提供嬰兒生長發育所需的必需脂肪酸。人乳脂具有特殊的脂肪結構，其C16:0主要分布在sn-2位，而混合植物油的C16:0則主要集中在sn-1,3位，難以被嬰兒吸收利用，并容易形成不溶性的鈣皂隨糞便排出，從而導致能量和鈣的雙重流失。可見，開發一種脂肪酸組成到脂肪結構都接近人乳脂的人乳脂替代品尤為重要。因此，人乳脂被視為“黃金標準”，作為傳統嬰兒配方奶粉脂肪調配的依據。人乳脂中最具代表性的甘油三酯是1,3-二油酸-2-棕櫚酸甘油三酯(OPO)，含量占到人乳脂總量的40％～50％，目前對其研究已經比較深入。然而，據相關文獻報道，1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯(OPL)在母乳中的含量也很高，中國地區的母乳中的OPL的含量甚至超過了OPO的含量。但是目前對OPL的研究還比較少。

目前獲取OPL的方法主要有從天然來源的油脂中獲取和酶法制備。豬油中含有OPL約16％，但是從豬油中獲取OPL會受到宗教信仰的限制且工藝比較復雜、存在健康風險。因此，從天然來源的油脂中獲取OPL存在著一定的難度。已有少量文獻報道酶法制備OPL，但是由于OPL是三元酸非對稱型甘油三酯，比二元酸對稱型甘油三酯的酶法制備工藝更復雜，技術難度更高。另外，由于脂肪酶對不同的脂肪酸具有選擇性差異且酶的價格高，尚無法大規模生產。

CN109402186A公布了一種將甘油三酯與脂肪酸或脂肪酸酯進行兩次酶反應制備OPL的工藝。首先將甘油三酯與脂肪酸或脂肪酸酯以1:(3～12)的摩爾比混合，加入脂肪酶，40～90℃下反應后除去反應體系中的游離脂肪酸或脂肪酸酯，隨后向反應器中重新加入脂肪酸或者脂肪酸酯進行二次反應，產物經純化后，得到富含OPL的油脂混合物。其特點是提供了一種OPL的新型合成方法，采用新型的合成方法，避免了OPL制備過程中原料昂貴、使用局限、純度較低等問題。

CN109468349A公布了一種以甘油三酯、油酸基酰基供體和亞油酸基酰基供體為原料，在溶劑體系或無溶劑體系下進行酶解反應制備OPL的方法。其特點是方法過程簡單且經過純化之后，產品中OPL的含量可提高為30％-50％。

以上是目前僅有的2篇專利報道OPL的制備方法。但是這兩種酶法制備OPL的方法成本較高，酶的價格高，另外該方法還存在酰基位移的技術壁壘無法克服。

發明內容

為解決現有技術的缺點和不足之處，本發明的首要目的在于提供一種利用微生物發酵制備1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯的方法。相比于目前已有的技術，這種方法提供了一種OPL的新型合成技術，采用微生物發酵制備OPL，避免了OPL制備過程中原料昂貴、使用局限、純度較低等問題，該方法過程簡單，成本低廉、綠色、工業化應用潛力巨大。

本發明目的通過以下技術方案實現：

一種利用微生物發酵制備1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯的方法，將渾濁紅球菌(Rhodococcus opacus)接入發酵培養基，進行發酵，得到發酵產物，離心，收集菌體，對菌體細胞壁進行破碎，收集油脂，得1-油酸-2-棕櫚酸-3-亞油酸甘油三酯；所述發酵培養基的碳源包括油酸乙酯、棕櫚酸乙酯和亞油酸乙酯。