[發明專利]hMSC生產試劑盒開發和質量管理標準優化和體系建立

在審

• 申請號: 201910727195.2
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN112342191A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 路春光
• 申請（專利權）人: 路春光
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及干細胞治療技術領域，具體涉及一種優化的從胎兒附屬物（臍血、臍帶、胎盤等）、毛囊、脂肪和牙髓等中分離間充質干細胞（MSC）,人間充質干細胞（hMSC）工業化生產體系和質量管理標準優化和體系建立；MSC擴增培養試劑盒和鑒定試劑盒及應用。根據《干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則》（試行）、《細胞制品研究與評價技術指導原則》(征求意見稿)以及2015版《中國藥典》通則9203——藥品微生物實驗室質量管理指導原則所規定的內容，建立原輔料控制、臍帶接收控制及間充質干細胞胞制劑控制的質量標準。本發明優化并建立了工藝和質量標準，提高了產量，為臨床應用，實現工業化生產創造了條件。

技術領域

本發明涉及干細胞治療技術領域，具體涉及一種優化的從胎兒附屬物（臍血、臍帶、胎盤等）、毛囊、脂肪和牙髓等中分離間充質干細胞（MSC）,人間充質干細胞（hMSC）工業化生產體系和質量管理標準優化和體系建立； MSC擴增培養試劑盒和鑒定試劑盒及應用。

背景技術

人間充質干細胞(human MSCs, hMSCs)是一類具有一定的自我復制更新和多向分化潛能的成體干細胞，廣泛存在于胎兒和成人各組織中，如骨髓、脂肪、皮膚、牙髓、肌腱，以及新生兒附屬組織，如臍帶、胎盤、羊膜等組織。除一定程度的分化潛能外，hMSCs還具有獨特的免疫調控和組織再生功能，參與調控異常免疫反應、維護免疫平衡，幫助機體形成有利于病損組織細胞修復或再生的微環境，以促進損傷組織細胞的修復或再生。

hMSCs獨特的生物學功能決定了其應具有廣泛的臨床適應癥，并使其成為近十年來細胞治療領域中發展最為廣泛、最為迅速的干細胞類型。過去10年來所積累的大量臨床前及臨床研究數據顯示，不同組織來源的hMSCs均具有不同程度，針對不同臨床適應癥的治療效果。目前在clinicaltrial.gov登記的各種自體或異體組織來源的hMSCs臨床適應癥類型或疾病亞型已有上百種，其中常見的臨床適應癥類型包括骨關節疾病、心血管疾病、器官功能衰竭、神經退行性疾病、移植物抗宿主病、多發性硬化、脊髓損傷、炎性結腸炎、脊髓側索硬化、系統性紅斑狼瘡等。

然而，無論是臨床前或臨床研究階段，現有的研究結果仍都存在不同程度的問題，而所有問題又都不同程度地匯聚到hMSCs的質量問題上。其中臨床前研究所表現的問題是，不同研發者所使用的hMSCs來源、培養體系、制備工藝、質量標準、評價技術等存在很大差異，也存在質量評價內容和評價技術的合理性等問題，很難形成相對統一的質量標準；臨床研究階段細胞質量的穩定性研究欠缺，細胞質量評價和受試者評估體系尚未建立等。

類似于所有治療性細胞產品，hMSCs代表著人類醫藥發展史上最為復雜的醫藥產品，具有傳統醫藥產品難以比擬的多樣性、變異性、復雜性和不穩定性等質量特性。為了有效保障包括hMSCs在內的所有治療性細胞的質量，為其標準化使用建立標準和規范化管理體系，hMSCs具備基本細胞生物學屬性、微生物學安全性、生物學安全性及生物學有效性“四大類”質量屬性。這“四大類”質量屬性，是質量標準、質量體系建立的對象，是臨床前研發階段首要解決的關鍵問題，也是整個細胞產品研發周期全質量要素的基礎。

在臨床應用中，MSC細胞培養過程中采用的試劑較多，標準不一致，培養過程中工作量大，培養時間長，工藝繁瑣，不穩定，染菌風險大，細胞質量標準難以控制，難在短時間內培養出質量均一的MSC細胞，迫切需要開發簡單、格式化的試劑盒，本發明提供一種MSC細胞培養添加劑MSC-Ⅱ，對添加劑的配方進行了優化，使MSC增殖能力提高10-20%，同時優選了血清，使生產成本降低50%，本發明改進了工藝，這對獲得大量間充質干細胞，滿足臨床試驗，實現工業化生產具有重要的意義；同時本發明優化了臍帶原代組織處理工藝，組織塊貼壁率達到95%以上，原代細胞得率提高10倍；優化了傳代培養工藝，用預傳代細胞的培養上清液終止消化，防止細胞出現損傷性拉絲，使顯微鏡下視野中細胞拉絲率降低至1%以下，傳代細胞擴增倍數由5倍提高至10倍，提高了細胞產量，由于細胞上清液是廢液，用來終止消化，降低了原材料消耗和生產成本。

發明內容