[發明專利]一種發酵乳桿菌及其凍干粉的制備方法

有效

• 申請號: 201910725588.X
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN110343642B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 趙迪;閔祥博;張春宇;矯艷平
• 申請（專利權）人: 江西仁仁健康微生態科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;A23L33/135;A23K10/18;A61K35/747;A61P31/04;C12R1/225
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

1.一種發酵乳桿菌，其特征在于，所述的發酵乳桿菌命名為發酵乳桿菌(Lactobacillus

fermentum)HCS08-005，該菌株已于2018年08月14日保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，保藏號為CGMCC?No.16259。

2.一種發酵乳桿菌凍干粉，其特征在于，制備方法包括如下步驟：

1)凍存菌種復蘇：取存于低溫冰箱內的權利要求1所述的發酵乳桿菌菌種凍存管，立即放入37℃水浴鍋內進行菌種復蘇，15～30s，至凍存管內液體全部融化；

2)菌種活化：按照10％接種量，將復蘇好的菌種直接接種至裝有基礎培養基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培養箱恒溫靜置培養17小時；

3)菌種擴培：按照5％接種量，將菌種活化結束的菌懸液接種至裝有基礎培養基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培養箱恒溫靜置培養8小時；

4)一級發酵：按照5％接種量，將菌種擴培結束的菌懸液接種至裝有優化培養基的發酵罐中，開啟攪拌槳，轉速為100rpm，通氣量為0，35℃恒溫培養，發酵開始時，設定自動流加食品級NaOH以調控菌液pH值至5.20-5.40，發酵進行9h開始，每0.5h監控菌液OD值，當連續兩次OD值之差＜0.2時，停止發酵；

5)二級發酵：按照6％接種量，將一級發酵結束的菌懸液接種至裝有優化培養基的發酵罐中，開啟攪拌槳，轉速為100rpm，通氣量為0，35℃恒溫培養，在發酵開始時通過流加食品級NaOH溶液至pH為5.20-5.40，發酵進行6h開始，每0.5h監控菌液OD值，當連續兩次OD值之差＜0.2時，發酵結束；

6)發酵液離心：二級發酵結束后，將發酵罐罐體溫度調低，當罐內發酵液溫度低于20℃時準備離心，離心設備采用管式離心機，離心前對轉鼓進行蒸汽滅菌30min，轉速為12000-14000rpm，結束進料后，空轉5min；

7)離心結束后，收集菌泥；

8)凍干保護劑添加，按照菌泥：保護劑＝1:1-3的體積比，向菌泥中添加凍干保護劑，

并攪拌、混合均勻；

9)冷凍干燥：將混合均勻的菌粉，分裝到凍干機托盤中，然后將凍干機托盤放入凍干機內進行菌粉的凍干，真空度0～1.0Pa，冷凍干燥機溫度設置共13個區段，第1區段預凍2h，結束溫度為-40℃；第2區段7h，結束溫度為-25℃；第3區段3h，結束溫度為-20℃；

第4區段3h，結束溫度為-15℃；第5區段6h，結束溫度為-10℃；第6區段6h，結束溫度為-5℃；第7區段4h，結束溫度為0℃；第8區段4h，結束溫度為5℃；第9區段4h，結束溫度為10℃；第10區段4h，結束溫度為15℃；第11區段4h，結束溫度為20℃；第12區段4h，結束溫度為25℃；第13區段3.5h，結束溫度為30℃；

10)凍干粉收集；

11)粉碎、包裝：按質量要求進行粉碎后包裝。

3.如權利要求2所述的發酵乳桿菌凍干粉，其特征在于，所述的基礎培養基按照以下配方制成：葡萄糖25.0-35.0g/L、酵母蛋白胨20.0-25.0g/L、酵母浸出物3.0-8.0g/L、檸檬酸2.0-6.0g/L、余量為純化水；按照配方比例稱量、加熱溶解，用1mol/L食品級NaOH溶液調培養基pH值至6.90-7.10，115℃下滅菌30min。

4.如權利要求3所述的發酵乳桿菌凍干粉，其特征在于，所述的基礎培養基按照以下配方制成：葡萄糖30.0g/L、酵母蛋白胨22.0g/L、酵母浸出物6.0g/L、檸檬酸4.0g/L、余量為純化水；按照配方比例稱量、加熱溶解，用1mol/L食品級NaOH溶液調培養基pH值至7.00，115℃下滅菌30min。

5.如權利要求2所述的發酵乳桿菌凍干粉，其特征在于：所述的優化培養基按照以下配方制成：酵母蛋白胨25.0-35.0g/L、葡萄糖20.0-30.0g/L、酵母浸出物5.0-15.0g/L、乳糖15.0-25.0g/L、結晶果糖2.0-8.0g/L、檸檬酸2.0-6.0g/L、L-蘋果酸5.0g/L、余量為純化水；按照配方比例稱量、加熱溶解，115℃下滅菌30min，用1mol/L食品級NaOH溶液調培養基pH值至6.00-6.50。