[發(fā)明專利]一種發(fā)酵乳桿菌及其凍干粉的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910725588.X
• 申請(qǐng)日: 2019-08-07
• 公開（公告）號(hào): CN110343642B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙迪;閔祥博;張春宇;矯艷平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西仁仁健康微生態(tài)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/04;A23L33/135;A23K10/18;A61K35/747;A61P31/04;C12R1/225
• 代理公司: 沈陽杰克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207
• 代理人: 金春華

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種發(fā)酵乳桿菌及其凍干粉的制備方法。該發(fā)酵乳桿菌命名為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus?fermentum)HCS08?005，該菌株已于2018年08月14日保藏在“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，保藏號(hào)為CGMCC?No.16259。該發(fā)酵乳桿菌耐酸能力強(qiáng)、耐胃腸液能力強(qiáng)、具有抑菌特性。其凍干粉的制備方法包括如下步驟：凍存菌種復(fù)蘇；菌種活化；菌種擴(kuò)培；一級(jí)發(fā)酵；二級(jí)發(fā)酵；發(fā)酵液離心；收集菌泥；凍干保護(hù)劑添加；冷凍干燥；凍干粉收集；粉碎、包裝。采用本方法制備的發(fā)酵乳桿菌凍干粉活菌數(shù)可達(dá)5千億CFU/g以上，存活率高，定植能力強(qiáng)，可應(yīng)用于飼料、藥品等領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一株耐酸能力強(qiáng)、耐受胃、腸液能力強(qiáng)、抑制腸道主要致病菌的發(fā)酵乳桿菌及其凍干粉的制備方法。

背景技術(shù)

國(guó)家衛(wèi)生部于2010年將發(fā)酵乳桿菌列入《可用于食品的菌種名單》，2016年將發(fā)酵乳桿菌CECT5716列入《可用于嬰幼兒食品的菌種名單》。發(fā)酵乳桿菌屬于乳桿菌科中的乳桿菌屬，革蘭氏陽性，兼性厭氧。菌體形態(tài)為桿狀，直徑0.5～0.9μm，長(zhǎng)度的差異比較大，多數(shù)為單個(gè)存在，也有成對(duì)排列。能在低pH值的人體胃液和高膽汁的腸道環(huán)境中存活，能夠調(diào)節(jié)宿主體內(nèi)微生物菌群的平衡，改善宿主體內(nèi)系統(tǒng)環(huán)境，對(duì)宿主健康具有促進(jìn)作用。

發(fā)酵乳桿菌為異型發(fā)酵乳酸桿菌，益生特性主要有：降解膽固醇、抑制腸道有害菌群、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗氧化等。

發(fā)酵乳桿菌經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、分離、冷凍干燥，加工制成發(fā)酵乳桿菌凍干粉，可應(yīng)用在飼料及藥品等領(lǐng)域。發(fā)酵乳桿菌的耐受胃腸液能力是保證其能夠通過人體胃腸液并發(fā)揮益生功能的關(guān)鍵因素。因此，獲得耐受胃液能力強(qiáng)、耐腸液能力強(qiáng)、抑制腸道主要致病菌的發(fā)酵乳桿菌是非常重要的。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)所述的發(fā)酵乳桿菌活菌數(shù)不高、耐胃腸液能力較差的問題，本發(fā)明的目的是提供一株活菌數(shù)高、耐酸能力強(qiáng)、耐胃腸液能力強(qiáng)、具有抑菌特性的發(fā)酵乳桿菌，以及該菌凍干粉的制備方法，在藥物組合物中的用途。

本發(fā)明所述的發(fā)酵乳桿菌，所述菌株命名為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)HCS08-005，該菌株已于2018年08月14日保藏在“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，保藏號(hào)為CGMCC?No.16259。

上述的發(fā)酵乳桿菌的凍干粉，制備方法包括如下步驟：

1)凍存菌種復(fù)蘇：取存于低溫冰箱內(nèi)的發(fā)酵乳桿菌菌種凍存管，立即放入37℃水浴鍋內(nèi)進(jìn)行菌種復(fù)蘇，15～30s，至凍存管內(nèi)液體全部融化；

2)菌種活化：按照10％接種量，將復(fù)蘇好的菌種直接接種至裝有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)17小時(shí)；

3)菌種擴(kuò)培：按照5％接種量，將菌種活化結(jié)束的菌懸液接種至裝有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的三角瓶中，三角瓶密封，35℃培養(yǎng)箱恒溫靜置培養(yǎng)8小時(shí)；

4)一級(jí)發(fā)酵：按照5％接種量，將菌種擴(kuò)培結(jié)束的菌懸液接種至裝有優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，開啟攪拌槳，轉(zhuǎn)速為100rpm，通氣量為0，35℃恒溫培養(yǎng)，發(fā)酵開始時(shí)，設(shè)定自動(dòng)流加食品級(jí)NaOH以調(diào)控菌液pH值至5.20-5.40，發(fā)酵進(jìn)行9h開始，每0.5h監(jiān)控菌液OD值，當(dāng)連續(xù)兩次OD值之差＜0.2時(shí)，停止發(fā)酵；

5)二級(jí)發(fā)酵：按照6％接種量，將一級(jí)發(fā)酵結(jié)束的菌懸液接種至裝有優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，開啟攪拌槳，轉(zhuǎn)速為100rpm，通氣量為0，35℃恒溫培養(yǎng)，在發(fā)酵開始時(shí)通過流加食品級(jí)NaOH溶液至pH為5.20-5.40，發(fā)酵進(jìn)行6h開始，每0.5h監(jiān)控菌液OD值，當(dāng)連續(xù)兩次OD值之差＜0.2時(shí)，發(fā)酵結(jié)束；