[發(fā)明專利]一種水曲柳嫩綠半致密型愈傷組織誘導(dǎo)不定芽再生的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910725313.6
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN111758566B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 詹亞光;于磊;李新宇
• 申請（專利權(quán)）人: 東北林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種水曲柳嫩綠半致密型愈傷組織誘導(dǎo)不定芽再生的方法，建立下胚軸和莖段通過愈傷組織途徑再生不定芽再生的方法，該方法特征如下：

(1)外植體來源：常規(guī)表面消毒，剝?nèi)〕墒炫撸?jīng)WPM培養(yǎng)至子葉展開時，切取下胚軸接種于a20培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽；切取株高3-5cm的水曲柳無菌苗兩個芽點之間的無芽莖段接種于c12培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織及不定芽；

(2)愈傷組織及不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：下胚軸a20培養(yǎng)基包含MS+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂+5mg/L 6-BA+1mg/L TDZ；莖段c12培養(yǎng)基包含MSB5+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂+5mg/L 6-BA+8mg/L TDZ+0.1mg/L IBA+2mg/L甘氨酸+5％椰子水，pH均為5.8；

(3)培養(yǎng)條件及誘導(dǎo)率：誘導(dǎo)材料經(jīng)避光培養(yǎng)14d后轉(zhuǎn)為光培養(yǎng)，光照強度80μmol*m^-2*s^-1、光16h/暗8h、溫度25±2℃、濕度80％-90％；20d時愈傷組織誘導(dǎo)率：莖段為99.15％，下胚軸為88.69％；30d時不定芽誘導(dǎo)率：莖段為33.33％，下胚軸為10.52％；

(4)培養(yǎng)狀態(tài)：下胚軸與莖段誘導(dǎo)形成的愈傷組織內(nèi)部硬度適中、略松散，表面會形成一些小的深綠色凸起，團塊間有空隙，利于新分裂和分化的細胞生存，從而形成芽原基，最終形成不定芽；

(5)下胚軸與莖段形成的愈傷組織比較：下胚軸形成的愈傷組織內(nèi)部質(zhì)地堅硬、生長速度較快、呈墨綠色、易老化；莖段形成的愈傷組織內(nèi)外均一、質(zhì)地較下胚軸略為松散、生長速度較慢、呈黃綠色，細胞團更為飽滿，更有利于愈傷組織局部的物質(zhì)積累，利于芽原基的形成，最終分化生長形成不定芽，不定芽多為叢生，且繼代后生長狀態(tài)良好，成活率高。