[發(fā)明專利]一種展示CyHV-2膜蛋白的重組桿狀病毒及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910724103.5 | 申請日： | 2019-08-07 |
| 公開（公告）號： | CN110452926B | 公開（公告）日： | 2022-06-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳紅英;曹志偉;南昊;許曉東 | 申請（專利權(quán)）人： | 西北農(nóng)林科技大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/866 | 分類號： | C12N15/866;A61K39/245;A61P31/22 |
| 代理公司： | 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 712100 陜西*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 展示 cyhv 膜蛋白 重組 桿狀病毒 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種展示CyHV-2膜蛋白的重組桿狀病毒，其特征在于，ORF25在桿狀病毒表面的展示通過將ORF25的胞外區(qū)與桿狀病毒AcMNPV gp64的信號肽和跨膜區(qū)進(jìn)行融合表達(dá)來實現(xiàn)，重組桿狀病毒為載體表達(dá)的ORF25融合蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO:3。
2.如權(quán)利要求1所述的重組桿狀病毒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1、從感染CyHV-2的組織勻漿中提取總DNA作為模板，以SEQ ID NO:1和SEQID NO:2為引物，擴(kuò)增ORF25的胞外區(qū)基因片段；
步驟2、將獲得的PCR產(chǎn)物用BamHI和EcoRI雙酶切，克隆到pQBD表達(dá)載體，獲得重組質(zhì)粒pQBD-ORF25；
步驟3、用pQBD-ORF25和線性化的AcMNPV bacmid qBac-III共轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后5天收集P0代重組病毒；繼續(xù)擴(kuò)增，獲得高滴度重組病毒；
步驟4、將重組桿狀病毒稀釋至滴度為4×10 3TCID 50/mL，將2cm大小的異育銀鯽放入其中浸浴2小時進(jìn)行免疫。
3.權(quán)利要求1所述展示CyHV-2膜蛋白的重組桿狀病毒在防控CyHV-2的感染疫苗制備過程中的應(yīng)用。
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