[發(fā)明專利]基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910716246.1
• 申請(qǐng)日: 2019-08-05
• 公開（公告）號(hào): CN110231392B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉全俊;朱立博;韓笑明;周曉祥;徐穎;蘇振;張振;黃炎;陸祖宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東南大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/48
• 分類號(hào): G01N27/48
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 陳風(fēng)平

1.一種基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)信號(hào)放大方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）制備具有三維空間結(jié)構(gòu)的DNA四面體，所述DNA四面體由四片核酸瓦片雜交合成：將第一單鏈核酸、第二單鏈核酸、第三單鏈核酸溶解于Tris-鎂鹽緩沖液中進(jìn)行雜交；所述第一單鏈核酸的濃度為70 nM，所述第二單鏈核酸的濃度為210 nM，所述第三單鏈核酸的濃度為210 nM；所述核酸瓦片由第一單鏈核酸、第二單鏈核酸及第三單鏈核酸雜交合成；所述第一單鏈核酸序列由78個(gè)堿基組成，所述第一單鏈核酸序列是SEQ ID NO：1，所述第二單鏈核酸序列由42個(gè)堿基組成，所述第二單鏈核酸序列是SEQ ID NO：2，所述第三單鏈核酸序列由31個(gè)堿基組成，所述第三單鏈核酸序列的5’末端修飾有一個(gè)羧基基團(tuán)，所述第三單鏈核酸序列是SEQ ID NO：3；

（2）DNA四面體與待測(cè)蛋白質(zhì)分子連接：將步驟（1）中制備的DNA四面體與1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺混合，加入所述待測(cè)蛋白質(zhì)分子，形成DNA四面體與蛋白質(zhì)復(fù)合物；

（3）采用固態(tài)納米孔檢測(cè)平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)：將步驟（2）中所得的DNA四面體與蛋白質(zhì)復(fù)合物溶液加入到固態(tài)納米孔檢測(cè)平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)信號(hào)放大方法，其特征在于，所述核酸瓦片雜交的方法為：先將所述第一單鏈核酸、第二單鏈核酸、第三單鏈核酸混合后放于95 ℃處理10 min，之后于55 ℃放置1 h，放于室溫48 h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)信號(hào)放大方法，其特征在于，步驟（2）中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與所述N-羥基琥珀酰亞胺的質(zhì)量比為2:3。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)信號(hào)放大方法，其特征在于，步驟（3）中，所述采用固態(tài)納米孔檢測(cè)平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)，包括將所述DNA四面體與蛋白質(zhì)復(fù)合物溶液加入到固態(tài)納米孔檢測(cè)平臺(tái)的檢測(cè)池的一側(cè)流道內(nèi)，將一對(duì)Ag/AgCl電極分別浸入所述檢測(cè)池流道內(nèi)的電解質(zhì)溶液中，施加300～900mV的跨膜電壓，采集電流阻斷信號(hào)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)信號(hào)放大方法，其特征在于，所述固態(tài)納米孔檢測(cè)平臺(tái)通過以下方法構(gòu)建：采用特氟龍檢測(cè)池，檢測(cè)池上具有直徑為1 mm流體通道，將帶有納米尺度孔洞的固態(tài)納米孔芯片安裝在檢測(cè)池中，并將電解質(zhì)溶液加入到檢測(cè)池的流道內(nèi)，形成固態(tài)納米孔檢測(cè)平臺(tái)。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于DNA四面體的固態(tài)納米孔單分子蛋白質(zhì)檢測(cè)信號(hào)放大方法，其特征在于，所述固態(tài)納米孔芯片為直徑為40 nm的氮化硅納米孔芯片，將所述氮化硅納米孔芯片用體積比為3:1的H₂SO₄溶液與H₂O₂的混合溶液處理，80 ℃浸泡30 min，清洗，氮?dú)獯蹈伞?/p>