[發明專利]一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法

在審

• 申請號: 201910708966.3
• 申請日: 2019-08-01
• 公開（公告）號: CN110305977A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 張靜霞;朱棠
• 申請（專利權）人: 莆田學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京權智天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11638
• 代理人: 王新愛

本發明公開了一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，涉及雙歧桿菌檢測領域，包括以下步驟：A：備料，B：提取DNA，C：條件，D：擴增檢測。本發明檢測方法有很強的抗干擾能力，靈敏度很高，檢測穩定，熒光PCR檢測方法可快速的檢測出食品中是否存在雙歧桿菌，可以滿足日常檢測的要求。

技術領域

本發明涉及雙歧桿菌檢測領域，特別涉及一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR 檢測方法。

背景技術

雙歧桿菌是一類存在于人體中非常重要的益生菌群，是人體健康的重要指標之一，于1899年首先在母乳喂養的健康嬰兒糞便中發現并分離出來的專性厭氧菌。研究證實雙歧桿菌具有平衡腸道菌群、降膽固醇、延緩衰老及抗腫瘤等生理功能。目前，有關雙歧桿菌的微生態制劑的研究已成為一大熱點，并廣泛應用于食品、保健和醫療等領域。食品安全國家標準規定了雙歧桿菌的檢驗鑒定標準是利用傳統培養基進行細菌形態和生化鑒定，并結合氣相色譜法測定雙歧桿菌的有機酸代謝產物，但此方法耗時耗力，難以在實際檢測中推廣，不能充分的滿足對食品中雙歧桿菌的檢測需求。

因此，發明一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法來解決上述問題很有必要。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR 檢測方法，解決了現有的問題。

(二)技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，包括以下步驟：

A：備料：采用青春雙歧桿菌和長雙歧桿菌培養物十倍梯度稀釋至10⁸CFU/mL-10CFU/mL，每個濃度樣品取1mL備用；

B：提取DNA：將不同混合樣品，使用DNA提取試劑盒提取DNA，每次DNA提取均設置提取空白對照，用微量分光光度計測定DNA質量濃度后，保存備用；

C：條件：以雙歧桿菌上游特異性引物FBP：5’-GTT GGG TTA AGT CCC GCA A-3’；雙歧桿菌下游特異性引物RBP：5’-TGA AGC CCT GGA CGT AAG G-3’；雙歧桿菌的特異性探針序列BP：5’-FAM-ACG TAA GGG GCA TGA TGA TCT GAC G-BHQ1-3’，熒光PCR反應體系為25μL；

D：擴增檢測：用青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌樣品DNA為模板以熒光PCR擴增進行靈敏度檢測，將不同濃度青春雙歧桿菌DNA，分別添加三種重量的大腸桿菌DNA，通過熒光PCR擴增進行抗干擾能力檢測。

可選的，所述步驟A中稀釋液為純牛奶。

可選的，步驟步驟B中溫度為-20℃。

可選的，所述步驟C中熒光PCR反應體系包含Master Mix12.5μL，上、下游引物(10μmol/L)各1.25μL，探針(10μmol/L)0.625μL，2.0μL的DNA 模板，去離子水補足至25μL。

可選的，所述步驟D中三種重量為300pg，3ng，30ng。

(三)有益效果

本發明提供了一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，具備以下有益效果：

(1)、本發明檢測方法有很強的抗干擾能力，靈敏度很高，檢測穩定。

(2)、本發明熒光PCR檢測方法，可快速的檢測出食品中是否存在雙歧桿菌，可以滿足日常檢測的要求。

附圖說明

圖1為本發明為實時熒光PCR擴增檢測結果示意圖。

具體實施方式