[發明專利]一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法

在審

• 申請號: 201910708966.3
• 申請日: 2019-08-01
• 公開（公告）號: CN110305977A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 張靜霞;朱棠
• 申請（專利權）人: 莆田學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 北京權智天下知識產權代理事務所(普通合伙) 11638
• 代理人: 王新愛

1.一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

A：備料：采用青春雙歧桿菌和長雙歧桿菌培養物十倍梯度稀釋至10⁸CFU/mL-10CFU/mL，每個濃度樣品取1mL備用；

B：提取DNA：將不同混合樣品，使用DNA提取試劑盒提取DNA，每次DNA提取均設置提取空白對照，用微量分光光度計測定DNA質量濃度后，保存備用；

C：條件：以雙歧桿菌上游特異性引物FBP：5’-GTT GGG TTA AGT CCC GCA A-3’；雙歧桿菌下游特異性引物RBP：5’-TGA AGC CCT GGA CGT AAG G-3’；雙歧桿菌的特異性探針序列BP：5’-FAM-ACG TAA GGG GCA TGA TGA TCT GAC G-BHQ1-3’，熒光PCR反應體系為252 L；

D：擴增檢測：用青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌樣品DNA為模板以熒光PCR擴增進行靈敏度檢測，將不同濃度青春雙歧桿菌DNA，分別添加三種重量的大腸桿菌DNA，通過熒光PCR擴增進行抗干擾能力檢測。

2.根據權利要求1所述的一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于：

所述步驟A中稀釋液為純牛奶。

3.根據權利要求1所述的一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于：

步驟步驟B中溫度為-20℃。

4.根據權利要求1所述的一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于：

所述步驟C中熒光PCR反應體系包含MMMMMM MMM12.52 L，上、下游引物(10μmol/L)各1.252 L，探針(10μmol/L)0.0252 L，2.02 L的DNA模板，去離子水補足至252 L。

5.根據權利要求1所述的一種食品中雙歧桿菌的實時熒光PCR檢測方法，其特征在于：

所述步驟D中三種重量為300pg，3ng，30ng。