[發明專利]從雞蛋清中高效提取卵類黏蛋白的方法

有效

• 申請號: 201910707837.2
• 申請日: 2019-08-01
• 公開（公告）號: CN110563837B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 付星;黃茜;梁怡鑫;黃孝懿;蔡朝霞;金永國;靳國峰;盛龍;邱寧;馬美湖
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C07K14/465;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 王和平;馮超

本發明涉及一種從雞蛋清中高效提取卵類黏蛋白的方法，該方法包括雞蛋清溶液的樣品制備、利用乙醇預處理蛋清溶液除雜蛋白、微波輔助硫酸銨第一步沉淀、微波輔助硫酸銨第二步沉淀四個步驟；所述的卵類黏蛋白提取工藝是采用微波功率140W、微波時間20s的參數來輔助硫酸銨沉淀過程。本發明解決了卵類黏蛋白分離純化操作復雜、周期長、純度及得率低等問題，利用微波技術誘導蛋白分子極化，及促進傳質的效應，建立了一種新興、簡單、快速和高效的卵類黏蛋白提取方法，該方法大大縮短了普通鹽析過程中的靜置時間，簡化操作過程，降低提取成本，提高分離效率，適用于大范圍生產，為微波技術在禽蛋類蛋白提純中的應用提供支持。

技術領域

本發明涉及卵類黏蛋白的高效提取方法，具體涉及一種從雞蛋清中高效提取卵類黏蛋白的方法。

背景技術

雞蛋清來源廣泛，價格低廉，干物質中蛋白質含量超過80％，是最理想的蛋白質資源之一。卵類黏蛋白(ovomucoid，簡稱OVM)，約占雞蛋清蛋白質總量的11％。其蛋白結構緊密，具有耐熱、耐酸堿以及抗胰蛋白酶消化等特性，可引起免疫反應。卵類黏蛋白有抑制腫瘤和抗癌等重要的免疫學作用，可作為食品檢測中的標記物，亦可用于預測兒童群體中雞蛋過敏癥的發生。因此純化獲得卵類黏蛋白，對食品和醫藥領域都具有非常重要的意義。

雖然蛋白質分離純化的方法很多，但到目前為止還沒有找到一種簡單經濟、適應范圍較廣的方法能夠將卵類黏蛋白從復雜的雞蛋組分中提取出來。早期，人們利用有機溶劑沉淀法提取卵類黏蛋白，例如三氯乙酸和丙酮溶劑，但是有機溶劑會導致卵類黏蛋白不同程度的變性。目前，卵類黏蛋白分離純化方法報道較多的包括雙水相萃取法、電泳法、層析法和沉淀法等。雙水相萃取法和電泳法處理量小且不具有實際應用價值；層析法獲得目標蛋白純度高，但是處理量小成本大，技術也非常繁瑣；目前分離純化卵類黏蛋白的沉淀技術較多是利用鹽析法沉淀，該方法簡便易操作，但存在的問題是沉淀法所需靜置時間較長，效率極低，分離所得的卵類黏蛋白純度普遍低于90％。國外研究中，2009年AnupongTankrathok利用兩步離子交換層析和沉淀相結合的方法純化卵類黏蛋白(Tankrathok A,Daduang S,Patramanon R,et al.Purification Process for the Preparation andCharacterizations of Hen Egg White Ovalbumin,Lysozyme,Ovotransferrin,andOvomucoid[J].PREPARATIVE BIOCHEMISTRYBIOTECHNOLOGY,2009,39(4):380-399.)，但是回收效益低(純度80％，回收率21％)且僅僅適用于實驗室水平的制備。2012年史曉霞所使用的丙酮沉淀法(史曉霞.蛋清卵類粘蛋白分離純化、結構表征及其過敏原性的研究[D].華中農業大學,2012.)提取出了純度95.3％的卵類黏蛋白，但在利用冷丙酮進行沉淀處理后還需使用纖維素離子交換法再次純化，步驟復雜，用時較長，且回收率僅僅達23.8％。E.D.N.S.Abeyrathne在2014年利用高濃度的乙醇與檸檬酸組合，從乙醇提取上清液中分離卵類黏蛋白(Abeyrathne E D N S,Lee H Y,Ahn D U.Separation of ovotransferrinand ovomucoid from chicken egg white[J].Poult Sci,2014,93(4):1010-1017.)，雖然蛋白回收率達到了95％，但其過程繁瑣，多個步驟需要靜置過夜，等待時間過長，不利于大規模制備；國內研究中，2014年王帥(王帥,吳子健,王素英,等.三步沉淀法純化雞卵類黏蛋白[J].食品科學,2014,35(24):74-80.)使用三步鹽析沉淀法純化雞卵類黏蛋白可取得較高純度，但提取率僅為27.05％，過程中鹽析反應耗時較長(12h左右)。因此，開發出一種操作簡便、耗時短暫、純度及回收率高的卵類黏蛋白分離純化方法，將具有重要的應用價值。