[發明專利]一種提高北美冬青抗氧化能力的研究方法

在審

• 申請號: 201910706966.X
• 申請日: 2019-08-01
• 公開（公告）號: CN110810101A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 何漪;余敏芬;何立平;李東賓;王曉飛;閆道良;袁虎威;鄭炳松
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: A01G17/00
• 分類號: A01G17/00;A01G7/06;G01N33/00
• 代理公司: 杭州中利知識產權代理事務所(普通合伙) 33301
• 代理人: 韓洪

本發明提出了一種提高北美冬青抗氧化能力的研究方法，包括以下步驟：選取2個北美冬青品種2年生扦插苗，在溫室大棚中緩苗2個月；選擇2個品種北美冬青扦插苗各18株，每個品種分成兩組，一組噴施褪黑素，另一組則噴施等量清水；然后同時進行相同的干旱脅迫處理；在處理后的第0、7、30天采集新鮮葉片，放到液氮中速凍，保存于?80℃超低溫冰箱中；測定超氧化物歧化酶、過氧化物酶活性以及丙二醛含量；通過施加外源褪黑素處理，對比分析了褪黑素對干旱脅迫下北美冬青品種扦插苗抗氧化能力的影響。研究結果可為探究北美冬青對干旱脅迫響應的生理機制以及提高北美冬青抗旱性的措施，北美冬青向干旱地區推廣奠定理論基礎。

【技術領域】

本發明涉及干旱脅迫下北美冬青生長研究的技術領域，特別是一種提高北美冬青抗氧化能力的研究方法。

【背景技術】

干旱是影響植物生存、生長和分布的重要環境脅迫因子，其在區域尺度上的影響范圍越來越大。植物缺乏正常生長和發育所需的充足水分時，會產生一系列的生理生化變化，如生物量減少、葉片含水量及水勢下降等，褪黑素作為一種新近發現的植物生長調節物質，在植物體內可清除活性氧和活性氮，它的生理作用與其類似于生長素(IAA)的分子結構密切相關，褪黑素能減緩干旱脅迫對蘋果葉片的加速衰老；能改善干旱脅迫下小麥幼苗的水分狀況；增加紫蘇幼苗抗氧化酶活性來減輕膜脂過氧化反應，維持滲透調節平衡，提高紫蘇幼苗耐旱能力。目前，褪黑素在提高植物抗旱性中的作用已在多個物種中得到了證實。

北美冬青(Ilex verticillata)又名輪生冬青，是冬青科冬青屬的一種落葉灌木，植株須根系，喜溫暖濕潤環境，耐濕性、抗寒性強，常以扦插的方式繁殖。關于北美冬青生理生化的研究表明，北美冬青在中午會出現明顯的光合“午休”現象；能通過抗氧化防御系統來抵御短期的低溫脅迫，而隨著時間的延長，植株的抗氧化能力則會下降。當前，對北美冬青抗旱性相關研究較少，限制了其在干旱地區的推廣應用，現提出一種提高北美冬青抗氧化能力的研究方法。

【發明內容】

本發明的目的就是解決現有技術中的問題，提出一種提高北美冬青抗氧化能力的研究方法，可為探究北美冬青對干旱脅迫響應的生理機制以及提高北美冬青抗旱性的措施，北美冬青向干旱地區推廣奠定理論基礎。

為實現上述目的，本發明提出了一種提高北美冬青抗氧化能力的研究方法，包括以下步驟：

S1.材料選擇：選取生長一致的2個北美冬青品種2年生扦插苗，三月下旬將苗木全部移栽到同一規格塑料盆中，移栽后的苗木在溫室大棚中緩苗2個月；

S2.褪黑素處理：在六月中旬選擇健康、長勢一致的2個品種北美冬青扦插苗各18株，每個品種隨機分成兩組，每組各9株，其中一組噴施褪黑素，另一組則噴施等量清水作為對照；

S3.干旱脅迫處理：待褪黑素處理結束之后兩組同時進行相同的干旱脅迫處理，均設置3個水平，每個水平處理3株北美冬青，其土壤相對含水量分別為田間最大持水量的80-85％、50-55％和35-40％；

S4.采樣保存：當土壤相對含水量達到相應的干旱脅迫條件時記為實驗采樣的第0天，在處理后的第0、7、30天采集新鮮葉片，放到液氮中速凍，保存于 -80℃超低溫冰箱中用于后續實驗的指標測定；

S5.測定指標：超氧化物歧化酶、過氧化物酶活性分別采用南京建成生物工程研究所生產的T-SOD試劑盒、POD試劑盒進行測定，丙二醛含量采用硫代巴比妥酸法測定，每個指標測定3個重復；

S6.數據處理與分析：采用Excel進行數據處理分析，SPSS19.0軟件進行方差分析和Duncan多重比較，用SigmaPlot 12.5軟件作圖，對測定的數據進行整理并分析。

作為優選，所述S1中的塑料盆選取的規格為：口徑16cm，深度15cm，并且每盆內定植1株，每盆裝栽培土壤1.7kg，由田園土和營養基質按3:1混勻而成。