[發(fā)明專(zhuān)利]一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無(wú)菌培養(yǎng)體系的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910701194.0
• 申請(qǐng)日: 2019-07-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110476807B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯小改;廉小芳;李昱瑩;郭麗麗;郭大龍;張有福;宋鵬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 洛陽(yáng)公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時(shí)亞娟

本發(fā)明涉及一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無(wú)菌培養(yǎng)體系的方法，屬植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域。包括如下步驟：1）挑選種子；2）去除外種皮；3）清洗并浸泡去皮種子；4）消毒處理；5）去除胚乳；6）接種培養(yǎng)。本發(fā)明方法選用‘鳳丹’牡丹的成熟種胚為外植體，經(jīng)嚴(yán)格挑選、去皮浸泡、消毒和接種培養(yǎng)，構(gòu)建的高效無(wú)菌培養(yǎng)體系在啟動(dòng)四周后，萌發(fā)率≥80％；污染率≤5％；無(wú)褐化現(xiàn)象。徹底解決了目前以鱗芽或土芽為外植體的牡丹組培技術(shù)無(wú)菌培養(yǎng)體系建立中的褐化問(wèn)題，并在體系建立過(guò)程中極大的降低了污染率，提高了牡丹組培技術(shù)在生產(chǎn)和實(shí)踐中建立無(wú)菌培養(yǎng)體系的應(yīng)用效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地，涉及一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無(wú)菌培養(yǎng)體系的方法。

背景技術(shù)

牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）屬芍藥科（Paeoniac eae）芍藥屬（Paeonia）多年生落葉亞灌木。‘鳳丹’（Paeonia ostii ‘Feng Dan’）是經(jīng)原種楊山牡丹的長(zhǎng)時(shí)間種植和栽培而逐漸形成的一種醫(yī)用和油用種。可將油用牡丹‘鳳丹’作為新型木本糧油植物資源進(jìn)行開(kāi)發(fā)和利用，通過(guò)與其他油料作物進(jìn)行比較，油用牡丹具有以下特點(diǎn)：高產(chǎn)出、高含油率、高品質(zhì)、低成本。因此大力推廣油用牡丹的種植對(duì)促進(jìn)我國(guó)糧油生產(chǎn)、改變食用油消費(fèi)結(jié)構(gòu)以及保障國(guó)家糧油安全均具有重要意義，其發(fā)展前景非常廣闊。

油用牡丹‘鳳丹’具有良好的觀賞和藥用價(jià)值，且耐旱耐寒耐貧瘠，結(jié)實(shí)能力較好，對(duì)防止水土流失、防風(fēng)固沙等方面有較好的作用，但其播種后代存在分離變異，不能較好的保存母本優(yōu)良性狀，且其種子存在生理后熟和二次休眠，導(dǎo)致育苗周期較長(zhǎng)；其無(wú)性繁殖主要是分株、扦插、壓條、嫁接等，存在繁殖系數(shù)低、成苗周期長(zhǎng)、出苗量少且質(zhì)量良莠不齊等問(wèn)題。與傳統(tǒng)育苗技術(shù)相比，組織培養(yǎng)技術(shù)有利于‘鳳丹’牡丹育種和快速繁殖，通過(guò)組培技術(shù)解決牡丹常規(guī)繁殖過(guò)程中存在的問(wèn)題，將是油用牡丹發(fā)展走向商品化和產(chǎn)業(yè)化的明顯趨勢(shì)，也是加速其繁殖和育種的有效措施。然而目前以鱗芽為外植體的油用牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)在應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中往往存在污染率高和褐化率高等問(wèn)題，極大的阻礙了油用牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)在生產(chǎn)和實(shí)踐中的應(yīng)用。因此，解決油用牡丹組培技術(shù)建立無(wú)菌培養(yǎng)體系中的褐化問(wèn)題以及降低其污染率是提高牡丹組培技術(shù)在生產(chǎn)和實(shí)踐中應(yīng)用效率的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無(wú)菌培養(yǎng)體系的方法，所述方法選用油用牡丹‘鳳丹’的成熟種胚為外植體，配合優(yōu)化組織培養(yǎng)方式，解決油用牡丹組織培養(yǎng)技術(shù)高效無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立在應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中存在的污染率高和褐化率高等問(wèn)題，提高牡丹組培技術(shù)在生產(chǎn)和實(shí)踐中的應(yīng)用效率。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的具體方案為：

一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無(wú)菌培養(yǎng)體系的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、選取當(dāng)年新采收的油用牡丹‘鳳丹’種子中顆粒飽滿(mǎn)、種皮色澤明亮無(wú)破裂的健康成熟種子，備用；

步驟二、使用尖嘴鉗將步驟一挑選備用的油用牡丹‘鳳丹’種子小心去除外種皮，保證去皮后胚乳完好無(wú)損；

步驟三、使用蒸餾水清洗經(jīng)步驟二處理的去外種皮種子并浸泡24-30 h；

步驟四、將經(jīng)步驟三浸泡后的去皮種子帶進(jìn)超凈工作臺(tái)，用紫外燈照射25-40min，再使用消毒液進(jìn)行消毒；所述使用消毒液消毒的步驟為：用無(wú)菌水涮洗2-3次，再用75%醫(yī)用酒精浸泡15-20 s后無(wú)菌水涮洗2-3次，然后用0.1%的升汞浸泡6-8 min后再以無(wú)菌水涮洗4-5次，棄洗液；

步驟五、去除胚乳：使用鑷子鑷取經(jīng)步驟四消毒后的種子至滅菌濾紙上吸去多余水分，再用手術(shù)刀沿種臍對(duì)面將胚乳切開(kāi)，小心取出種胚；