[發明專利]一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無菌培養體系的方法

有效

• 申請號: 201910701194.0
• 申請日: 2019-07-31
• 公開（公告）號: CN110476807B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 侯小改;廉小芳;李昱瑩;郭麗麗;郭大龍;張有福;宋鵬
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時亞娟

1.一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無菌培養體系的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟一、選取當年新采收的油用牡丹‘鳳丹’種子中顆粒飽滿、種皮色澤明亮無破裂的健康成熟種子，備用；

步驟二、使用尖嘴鉗將步驟一挑選備用的油用牡丹‘鳳丹’種子小心去除外種皮，保證去皮后胚乳完好無損；

步驟三、使用蒸餾水清洗經步驟二處理的去外種皮種子并浸泡24-30 h；

步驟四、將經步驟三浸泡后的去皮種子帶進超凈工作臺，用紫外燈照射25-40 min，再使用消毒液進行消毒；所述使用消毒液消毒的步驟為：用無菌水涮洗2-3次，再用75%醫用酒精浸泡15-20 s后無菌水涮洗2-3次，然后用0.1%的升汞浸泡6-8 min后再以無菌水涮洗4-5次，棄洗液；

步驟五、去除胚乳：使用鑷子鑷取經步驟四消毒后的種子至滅菌濾紙上吸去多余水分，再用手術刀沿種臍對面將胚乳切開，小心取出種胚；

步驟六、使用鑷子鑷取健康種胚胚根向下接種于誘導油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚組織培養無根試管苗的無根試管苗誘導培養基中進行誘導培養；

步驟七、將經步驟六接種后的培養基移至組培室進行5-10 d的暗培養后進行正常光照培養，組培室光照強度為2000-3000 Lx，光照周期為16 h/d，設置組培室環境相對濕度為85%-95%，室內溫度為23-26 ℃，在此條件下培養4-5周后即可由油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚得到無根試管苗，實現油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無菌培養體系的建立；

所述無根試管苗誘導培養基是由改良MS培養基、蔗糖30 g/L、瓊脂8 g/L、6-BA 1 mg/L、NAA 0.8 mg/L和椰汁75g/L組成，pH值5.8-6.0；

所述改良MS培養基為將基礎MS培養基配方中CaCl₂·2H₂O的濃度改良為880 mg/L的改良版MS培養基。

2.根據權利要求1所述的一種建立油用牡丹‘鳳丹’成熟種胚無菌培養體系的方法，其特征在于：步驟三所述浸泡期間多次攪拌及清洗以去除內種皮。