[發明專利]一種脂肪組織RNA的提取方法在審

申請號：	201910699963.8	申請日：	2019-07-31
公開（公告）號：	CN110241112A	公開（公告）日：	2019-09-17
發明（設計）人：	張珊珊;丁長歡;孫志彬;邵瑞蓮;王夢;余丹	申請（專利權）人：	天津康普森檢驗檢測有限公司
主分類號：	C12N15/10	分類號：	C12N15/10
代理公司：	天津合正知識產權代理有限公司 12229	代理人：	呂琦
地址：	300300 天津***	國省代碼：	天津;12
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摘要：
搜索關鍵詞：	脂肪組織過濾柱吸附預處理酶消化滴加時長萃取洗滌損傷
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【說明書】：

本發明提供了一種脂肪組織RNA的提取方法，包括脂肪組織預處理，萃取，過濾柱吸附RNA，洗滌RNA，收集RNA等步驟，其中在過濾柱吸附RNA步驟中，采用了在過濾柱上滴加DNaseI酶消化gDNA的方式，去除了gDNA的干擾，同時避免了RNA的損傷，同時該提取方法還減少了操作步驟時長，降低了RNA降解的風險，提高了RNA提取的純度。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其是涉及一種脂肪組織RNA的提取方法。

背景技術

脂肪組織是能量儲存的器官，是重要的內分泌系統，它影響著機體的胰島素敏感性，血壓水平，內皮功能，纖溶活動及炎癥反應，參與多種重要病理生理過程，同時也涉及了多種和肥胖相關疾病的發生和發展。深入分析脂肪組織的基因表達情況，對于我們研究脂肪組織的代謝過程，分析其對病理生理功能的調控都起到至關重要的作用，而研究這些過程的首要任務就是能夠穩定的獲得高純度的脂肪組織RNA。

RNA的提取方法是現代分子生物學一項很成熟的技術，目前已有很多商品化的RNA提取試劑盒。但不同組織由于組織的特異性,在RNA提取過程中會產生一些特別的要求,脂肪組織單位體積細胞數較少,且單位細胞RNA含量也相對較少,這增加了從脂肪組織提取RNA的難度。而且由于干擾物質較多，使用常規的商品化試劑盒，往往不能穩定的獲得高質量RNA，反而會損失大量miRNA。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在提出一種脂肪組織RNA的提取方法，以解決脂肪組織RNA的提取過程中難以有效去除gDNA等雜質，穩定高效的獲得高質量RNA的問題。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種脂肪組織RNA的提取方法，包括以下步驟：

(1)取脂肪組織0.5-250mg，加入裂解液,用勻漿儀勻漿至無明顯顆粒，室溫靜置10min，然后10000g離心5min，去除上層油層和下層不溶物，取中間層備用；

(2)向步驟(1)所取中間層中加入勻漿添加液，震蕩混勻，然后冰浴10min；加入酚酸-氯仿，震蕩混勻，室溫下10000g離心5min，然后取上層水相部分，加入1.25倍體積的無水乙醇，制成混合液備用；

(3)把步驟(2)中制備的混合液滴加到過濾柱上，然后10000g離心15s，棄去廢液；再在過濾柱上滴加700μL洗滌液,10000g離心5-10s，棄去廢液；最后在過濾柱膜上滴加80μLDNase I酶混合液，室溫靜置15min；

(4)在靜置后的過濾柱上滴加500μL洗滌液，10000g離心5-10s，棄去廢液，并重復本步驟；

(5)將過濾柱在10000g離心1min，棄去廢液；加入100μL 95℃的洗脫液,離心30s，收集RNA，并保存于-80℃。

進一步的，步驟(1)中勻漿儀在使用前需要依次用DEPC水、5％雙氧水、75％乙醇和DEPC水消毒。

進一步的，步驟(1)中如所取脂肪組織為凍存組織，應提前用PBS溶液洗去組織上殘留的RNA保存液。

進一步的，步驟(2)中加入酚仿混勻離心后，溶液如果沒有分層，或分層效果不好，則需要重新離心。