[發(fā)明專利]一種脂肪組織RNA的提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910699963.8 | 申請日： | 2019-07-31 |
| 公開（公告）號： | CN110241112A | 公開（公告）日： | 2019-09-17 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張珊珊;丁長歡;孫志彬;邵瑞蓮;王夢;余丹 | 申請（專利權）人： | 天津康普森檢驗檢測有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 天津合正知識產權代理有限公司 12229 | 代理人： | 呂琦 |
| 地址： | 300300 天津*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 脂肪組織 過濾柱 吸附 預處理 酶消化 滴加 時長 萃取 洗滌 損傷 | ||
1.一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)取脂肪組織0.5-250mg，加入裂解液,用勻漿儀勻漿至無明顯顆粒，室溫靜置10min，然后10000g離心5min，去除上層油層和下層不溶物，取中間層備用；
(2)向步驟(1)所取中間層中加入RNA富集液，震蕩混勻，然后冰浴10min；加入酚酸-氯仿，震蕩混勻，室溫下10000g離心5min，然后取上層水相部分，加入1.25倍體積的無水乙醇，制成混合液備用；
(3)把步驟(2)中制備的混合液滴加到過濾柱上，然后10000g離心15s，棄去廢液；再在過濾柱上滴加700μL洗滌液,10000g離心5-10s，棄去廢液；最后在過濾柱膜上滴加80μLDNaseI酶混合液，室溫靜置15min；
(4)在靜置后的過濾柱上滴加500μL洗滌液，10000g離心5-10s，棄去廢液，并重復本步驟；
(5)將過濾柱在10000g離心1min，棄去廢液；加入100μL 95℃的洗脫液,離心30s，收集RNA，并保存于-80℃。
2.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(1)中勻漿儀在使用前需要依次用DEPC水、5％雙氧水、75％乙醇和DEPC水清洗消毒。
3.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(1)中如所取脂肪組織為凍存組織，應提前用PBS溶液洗去組織上殘留的RNA保存液。
4.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(2)中加入酚仿混勻離心后，溶液如果沒有分層，或分層效果不好，則需要重新離心。
5.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(2)中加入的無水乙醇為室溫條件下的無水乙醇。
6.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(3)中加入的洗滌溶液中混有無水乙醇。
7.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(3)中滴加的各液體應與整個過濾柱膜充分接觸。
8.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(4)中加入的洗滌溶液中混有無水乙醇。
9.根據權利要求1所述的一種脂肪組織RNA的提取方法，其特征在于：步驟(3)、(4)、(5)中所述的過濾柱為玻璃纖維膜過濾柱。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于天津康普森檢驗檢測有限公司，未經天津康普森檢驗檢測有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權和技術合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201910699963.8/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
