[發(fā)明專利]一種敲除大腸桿菌醛脫氫酶基因提高1,2,4-丁三醇產(chǎn)量的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910696030.3 | 申請日： | 2019-07-30 |
| 公開（公告）號： | CN110343653B | 公開（公告）日： | 2021-06-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 諸葛斌;杜宣慧;狄瑩瑩;陸信曜;宗紅 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/53;C12N9/02;C12N15/113;C12N15/90;C12P7/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 大腸桿菌 脫氫酶 基因 提高 丁三醇 產(chǎn)量 方法 | ||
1.一種重組大腸桿菌，其特征在于，是以
2.如權(quán)利要求1所述的重組大腸桿菌，其特征在于，所述
3.一種生產(chǎn)1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，應(yīng)用權(quán)利要求1-2任一所述的重組大腸桿菌進行發(fā)酵。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵條件為：
（1）挑取重組大腸桿菌單菌落接種到液體LB培養(yǎng)基，35-39℃、200-220 rpm培養(yǎng)10-20h，獲得種子液；
（2）以體積比1-5%的接種量將步驟（1）的種子液接種到新的液體LB培養(yǎng)基中，35-39℃、200-220 rpm，搖瓶培養(yǎng)8-14 h，獲得發(fā)酵液；
（3）以體積比10-15%的接種量將步驟（2）的發(fā)酵液接種到裝液量為30-50%的發(fā)酵罐中，發(fā)酵溫度35-39℃，轉(zhuǎn)速400-450 rpm，通氣量1.5-2 vvm，pH=6.0-7.0，培養(yǎng)50-80 h。
5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述方法用于醫(yī)藥或化工領(lǐng)域。
6.權(quán)利要求1-2任一所述的重組大腸桿菌的構(gòu)建方法，其特征在于，在
7.如權(quán)利要求6所述的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
A.以pTargetF質(zhì)粒的基因為模板，設(shè)計sgRNA引物，以大腸桿菌醛脫氫酶基因序列為模板，設(shè)計引物，利用融合PCR將片段融合；
B.用電轉(zhuǎn)法將融合片段轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，并篩選出陽性菌；
C.消除pTargetF質(zhì)粒，得到大腸桿菌醛脫氫酶基因缺失的重組大腸桿菌。
8.權(quán)利要求1-2任一所述的重組大腸桿菌在制備1,2,4-丁三醇中的應(yīng)用。
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