[發(fā)明專(zhuān)利]一種大豆灰斑病離體葉片鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910694334.6
• 申請(qǐng)日: 2019-07-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110257474A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓英鵬;曲盈帆;趙雪;滕衛(wèi)麗;李瑞瓊;戰(zhàn)宇航;李海燕;李文濱
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/18
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 田鴻儒

本發(fā)明公開(kāi)了一種大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，涉及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，克服田間鑒定易受時(shí)間、空間等環(huán)境因素的干擾影響；克服田間鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性低、重復(fù)性較差的問(wèn)題。本發(fā)明提供的方法為：取待測(cè)品種大豆葉片預(yù)處理；將預(yù)處理后的大豆葉片置于保持葉片正常存活的環(huán)境下；用高壓水槍對(duì)所得葉片進(jìn)行蒸餾水噴打壓力處理；用高壓噴霧器將灰斑病原菌孢子懸浮液均勻噴灑到所得葉片表面進(jìn)行接種；所得葉片培養(yǎng)14天后統(tǒng)計(jì)葉片發(fā)病情況，從而判定待測(cè)品種的抗病性。該方法具有環(huán)境可控、鑒定準(zhǔn)確、顯癥時(shí)間更短，顯癥效果更好等特點(diǎn)，可用于大豆抗灰斑病種質(zhì)資源篩選，選育抗源為抗病育種提供優(yōu)異親本。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種大豆灰斑病離體葉片鑒定方法。

背景技術(shù)

大豆灰斑病是一種危害嚴(yán)重，發(fā)生范圍廣的世界性大豆真菌病害，嚴(yán)重威脅大豆的生產(chǎn)。在我國(guó)，尤以東北三省發(fā)生最為嚴(yán)重，嚴(yán)重發(fā)生年份可使大豆減產(chǎn)30％左右。目前，防治大豆灰斑病最經(jīng)濟(jì)、安全有效的方法是選育并利用抗病品種，因此，高效準(zhǔn)確鑒定抗病種質(zhì)的方法對(duì)于選育抗病品種具有重要意義。目前大豆灰斑病的鑒定方法包括田間孢子噴霧法、室內(nèi)大豆灰斑病菌毒素法和菌絲塊離體葉接種鑒定法，三種鑒定大豆灰斑病的方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，受到每種方法的技術(shù)手段、成本及操作難度的限制難以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)小范圍多重復(fù)簡(jiǎn)單準(zhǔn)確的進(jìn)行接種鑒定實(shí)驗(yàn)，尤其在被測(cè)品種樣本容量大的情況下，如進(jìn)行較準(zhǔn)確重復(fù)性較好的大規(guī)模種質(zhì)資源抗灰斑病鑒定的難度很大。

目前大豆灰斑病的鑒定方法包括田間孢子噴霧法、室內(nèi)大豆灰斑病菌毒素法和菌絲塊離體葉接種鑒定法，以上鑒定方法均存在明顯的不足之處，難于在實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用，其中田間孢子噴霧法易受時(shí)間和空間限制、鑒定結(jié)果重復(fù)性差、準(zhǔn)確性低且易對(duì)植株造成毀滅性傷害；室內(nèi)大豆灰斑病菌毒素法的鑒定結(jié)果同大田鑒定結(jié)果的基本符合率較低(62.37％)；菌絲塊離體葉接種鑒定法的發(fā)病率較差，對(duì)鑒定環(huán)境要求高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種基于高壓水槍處理的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，該方法克服田間鑒定易受時(shí)間、空間等環(huán)境因素的干擾影響；克服田間鑒定噴霧處理葉片不均勻引起的鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性低；克服田間鑒定重復(fù)性較差的問(wèn)題。

本發(fā)明提供的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，按照以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

(1)取待測(cè)品種大豆葉片預(yù)處理；

(2)將預(yù)處理后的大豆葉片置于保持葉片正常存活的環(huán)境下；

(3)用高壓水槍對(duì)步驟(2)所得葉片進(jìn)行蒸餾水噴打壓力處理；

(4)用高壓噴霧器將灰斑病原菌孢子懸浮液均勻噴灑到步驟(3)所得葉片表面進(jìn)行接種；

(5)步驟(4)所得葉片培養(yǎng)14天后統(tǒng)計(jì)葉片發(fā)病情況，從而判定待測(cè)品種的抗病性。

步驟(1)所述大豆葉片預(yù)處理，具體為：選取同一位節(jié)生長(zhǎng)勢(shì)相近的新鮮大豆完全展開(kāi)葉，將帶柄三出復(fù)葉剪下后再將三出復(fù)葉的三片小葉分別剪下，用無(wú)菌水沖洗干凈。

步驟(2)所述保持葉片正常存活的環(huán)境，制備方法為：在容器底部鋪設(shè)紗布，紗布上鋪設(shè)厚度為8.32-9.71mm且厚度均勻的脫脂棉層，脫脂棉層上鋪設(shè)表層紗布，向容器內(nèi)加入蒸餾水，浸潤(rùn)紗布及脫脂棉，加水量以達(dá)到紗布和脫脂棉的最大持水量為準(zhǔn)。

步驟(1)預(yù)處理后的葉片，按品種號(hào)有序地將葉片正面朝上擺放在步驟(2)所述保持葉片正常存活的環(huán)境的表層紗布表面，葉柄與表層紗布緊密接觸，葉片之間水平/垂直距離為5-7cm。

步驟(3)所述高壓水槍處理，具體為：使高壓水槍的出水方向垂直于葉片表面，邊向葉片表面噴水邊移動(dòng)，移動(dòng)方式為：對(duì)同一葉片，橫向移動(dòng)完成全部葉片表面的噴水處理后，再縱向移動(dòng)完成全部葉片表面的噴水處理，最后以螺旋方式移動(dòng)，完成全部葉片表面的噴水處理。

步驟(3)所述高壓水槍處理，高壓水槍額定排氣壓力為0.7Mpa。