[發明專利]一種大豆灰斑病離體葉片鑒定方法

在審

• 申請號: 201910694334.6
• 申請日: 2019-07-30
• 公開（公告）號: CN110257474A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 韓英鵬;曲盈帆;趙雪;滕衛麗;李瑞瓊;戰宇航;李海燕;李文濱
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12R1/645
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 田鴻儒

1.一種大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)取待測品種大豆葉片預處理；

(2)將預處理后的大豆葉片置于保持葉片正常存活的環境下；

(3)用高壓水槍對步驟(2)所得葉片進行蒸餾水噴打壓力處理；

(4)用高壓噴霧器將灰斑病原菌孢子懸浮液均勻噴灑到步驟(3)所得葉片表面進行接種；

(5)步驟(4)所得葉片培養14天后統計葉片發病情況，從而判定待測品種的抗病性。

2.根據權利要求1所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(1)所述大豆葉片預處理，具體為：選取同一位節生長勢相近的新鮮大豆完全展開葉，將帶柄三出復葉剪下后再將三出復葉的三片小葉分別剪下，用無菌水沖洗干凈。

3.根據權利要求1所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(2)所述保持葉片正常存活的環境，制備方法為：在容器底部鋪設紗布，紗布上鋪設厚度為8.32-9.71mm且厚度均勻的脫脂棉層，脫脂棉層上鋪設表層紗布，向容器內加入蒸餾水，浸潤紗布及脫脂棉，加水量以達到紗布及脫脂棉的最大持水量為準。

4.根據權利要求3所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(1)預處理后的葉片，按品種號有序地將葉片正面朝上擺放在步驟(2)所述保持葉片正常存活的環境的表層紗布表面，葉柄與表層紗布緊密接觸，葉片之間水平/垂直距離為5-7cm。

5.根據權利要求1所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(3)所述高壓水槍處理，具體為：使高壓水槍的出水方向垂直于葉片表面，邊向葉片表面噴水邊移動，移動方式為：對同一葉片，橫向移動完成全部葉片表面的噴水處理后，再縱向移動完成全部葉片表面的噴水處理，最后以螺旋方式移動，完成全部葉片表面的噴水處理。

6.根據權利要求6所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(3)所述高壓水槍處理，高壓水槍額定排氣壓力為0.7 Mpa。

7.根據權利要求6所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(3)所述高壓水槍處理，高壓水槍槍頭與葉片的距離為20-25cm。

8.根據權利要求1所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：所述灰斑病原菌孢子懸浮液孢子濃度為1×106個/mL。

9.根據權利要求3所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(4)所述高壓噴霧器噴頭與葉片表面垂直，噴頭與步驟(2)所述保持葉片正常存活的環境中的容器底部的距離為5.5cm。

10.根據權利要求1所述的大豆灰斑病離體葉片鑒定方法，其特征在于：步驟(5)所述培養，培養溫度為24-28℃，葉面濕潤期為48h。