[發(fā)明專利]基于微生物轉(zhuǎn)化續(xù)隨子二萜烷型衍生物的方法及其制藥用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910692893.3
• 申請日: 2019-07-30
• 公開（公告）號: CN112301063B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程志紅;劉欣
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12P7/62;A61K31/122;A61K31/22;A61P35/00;C12R1/785;C12R1/645;C12R1/65
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.基于微生物轉(zhuǎn)化續(xù)隨子二萜烷型衍生物的方法，其特征在于：用多型孢毛霉Mucor polymorphosporus分別對千金子甾醇(euphorbiasteroid)和環(huán)氧續(xù)隨子醇(epoxylathyrol)進行微生物轉(zhuǎn)化；使用雅致小克銀漢霉Cunninghamella elegans和傘枝犁頭霉Absidia corymbifera對千金子甾醇(Euphorbiasteroid)進行了微生物轉(zhuǎn)化，獲得下式的續(xù)隨子二萜烷型化合物：

其中，

化合物1 續(xù)隨子醇：R₁=R₂=R₃=R₄=H

化合物2 大戟因子L3：R₁=Bz, R₂=R₄=Ac, R₃=H

化合物3 8β-環(huán)丙甲酰氧基大戟因子L3：R₁=Bz, R₂=R₄=Ac, R₃=

所述方法包括步驟：

（1）將生長在瓊脂培養(yǎng)基上的多型孢毛霉Mucor polymorphosporus、雅致小克銀漢霉Cunninghamella elegans和傘枝犁頭霉Absidia corymbifera三種菌絲分別劃線接種于馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，得試管種；

（2）將試管種中的菌絲接種到250 mL的三角瓶中，每瓶含有PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)后獲得種子液；

（3）將種子液接入新鮮馬鈴薯培養(yǎng)基，培養(yǎng)后，加入轉(zhuǎn)化底物千金子甾醇或環(huán)氧續(xù)隨子醇的乙醇溶液，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)；

（4）將發(fā)酵液用布氏漏斗減壓過濾，獲得發(fā)酵濾液和菌體，濾液用乙酸乙酯萃取，菌體剪碎，混懸于適量乙酸乙酯中，超聲振蕩提取后過濾，合并乙酸乙酯層，減壓蒸干，發(fā)酵產(chǎn)物用半制備HPLC法分離得到發(fā)酵產(chǎn)物續(xù)隨子醇(1)、大戟因子L3(2)和8β-環(huán)丙甲酰氧基大戟因子L3(3)。

2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述的三種菌絲分別劃線接種于馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，在20-28 °C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-7天，得試管種。

3. 按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述的三角瓶中，含有50mL的PDA培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為28 °C，轉(zhuǎn)速為120 rpm，培養(yǎng)時間為3天。

4. 按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，將種子液按2%體積比接入新鮮馬鈴薯培養(yǎng)基，28 °C，120 rpm條件下培養(yǎng)24-72小時后，加入轉(zhuǎn)化底物千金子甾醇或環(huán)氧續(xù)隨子醇的乙醇溶液, 在28 °C、120 rpm的條件下轉(zhuǎn)化培養(yǎng)7天。

5. 按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）中，所述的濾液按1:1.5體積比用乙酸乙酯萃取3次，超聲振蕩提取10 min后過濾。

6.一種藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1所述的方法制得的化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物及藥學(xué)上可接受的載體。

7.權(quán)利要求6所述的藥物組合物在用于制備抗腫瘤多藥耐藥的藥物中的用途。