[發明專利]基于微生物轉化續隨子二萜烷型衍生物的方法及其制藥用途

有效

• 申請號: 201910692893.3
• 申請日: 2019-07-30
• 公開（公告）號: CN112301063B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發明（設計）人: 程志紅;劉欣
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12P7/26
• 分類號: C12P7/26;C12P7/62;A61K31/122;A61K31/22;A61P35/00;C12R1/785;C12R1/645;C12R1/65
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.基于微生物轉化續隨子二萜烷型衍生物的方法，其特征在于：用多型孢毛霉Mucor polymorphosporus分別對千金子甾醇(euphorbiasteroid)和環氧續隨子醇(epoxylathyrol)進行微生物轉化；使用雅致小克銀漢霉Cunninghamella elegans和傘枝犁頭霉Absidia corymbifera對千金子甾醇(Euphorbiasteroid)進行了微生物轉化，獲得下式的續隨子二萜烷型化合物：

其中，

化合物1 續隨子醇：R₁=R₂=R₃=R₄=H

化合物2 大戟因子L3：R₁=Bz, R₂=R₄=Ac, R₃=H

化合物3 8β-環丙甲酰氧基大戟因子L3：R₁=Bz, R₂=R₄=Ac, R₃=

所述方法包括步驟：

（1）將生長在瓊脂培養基上的多型孢毛霉Mucor polymorphosporus、雅致小克銀漢霉Cunninghamella elegans和傘枝犁頭霉Absidia corymbifera三種菌絲分別劃線接種于馬鈴薯固體培養基上，在恒溫培養箱中培養，得試管種；

（2）將試管種中的菌絲接種到250 mL的三角瓶中，每瓶含有PDA培養基，培養后獲得種子液；

（3）將種子液接入新鮮馬鈴薯培養基，培養后，加入轉化底物千金子甾醇或環氧續隨子醇的乙醇溶液，轉化培養；

（4）將發酵液用布氏漏斗減壓過濾，獲得發酵濾液和菌體，濾液用乙酸乙酯萃取，菌體剪碎，混懸于適量乙酸乙酯中，超聲振蕩提取后過濾，合并乙酸乙酯層，減壓蒸干，發酵產物用半制備HPLC法分離得到發酵產物續隨子醇(1)、大戟因子L3(2)和8β-環丙甲酰氧基大戟因子L3(3)。

2.按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述的三種菌絲分別劃線接種于馬鈴薯固體培養基上，在20-28 °C的恒溫培養箱中培養3-7天，得試管種。

3. 按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，所述的三角瓶中，含有50mL的PDA培養基，培養溫度為28 °C，轉速為120 rpm，培養時間為3天。

4. 按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，將種子液按2%體積比接入新鮮馬鈴薯培養基，28 °C，120 rpm條件下培養24-72小時后，加入轉化底物千金子甾醇或環氧續隨子醇的乙醇溶液, 在28 °C、120 rpm的條件下轉化培養7天。

5. 按權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（4）中，所述的濾液按1:1.5體積比用乙酸乙酯萃取3次，超聲振蕩提取10 min后過濾。

6.一種藥物組合物，其中含有權利要求1所述的方法制得的化合物或其藥學上可接受的溶劑化物及藥學上可接受的載體。

7.權利要求6所述的藥物組合物在用于制備抗腫瘤多藥耐藥的藥物中的用途。