[發(fā)明專利]基于類彈性蛋白展示N-端腦鈉肽前體雙抗原表位的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910687576.2 | 申請日： | 2019-07-29 |
| 公開（公告）號： | CN110358785A | 公開（公告）日： | 2019-10-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡學(xué)軍;楊春光;付鑫 | 申請（專利權(quán)）人： | 大連大學(xué) |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/62 |
| 代理公司： | 大連八方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21226 | 代理人： | 衛(wèi)茂才 |
| 地址： | 116622 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 抗原表位 重組蛋白 表位 氨基酸殘基 大腸埃希菌 類彈性蛋白 腦鈉肽 前體 展示 制備 類彈性蛋白標簽 抗原表位基因 融合表達載體 原核表達載體 夾心ELISA法 表達系統(tǒng) 可逆相變 融合基因 校準品 克隆 合成 融合 檢測 | ||
1.基于類彈性蛋白(elastic-like polypeptide, ELP)展示N-端腦鈉肽前體(amino-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)雙抗原表位的制備方法，可以制備用于夾心ELISA法檢測NT-proBNP的校準品，其特征在于：首先將用柔鏈連接的NT-proBNP第13-20位氨基酸殘基表位、第63-71位氨基酸殘基表位與ELP用Poly N柔鏈連接融合，緊接著將編碼以上重組蛋白基因合成并克隆到原核表達載體上，構(gòu)建成NT-proBNP雙抗原表位基因的融合表達載體，最后利用大腸埃希菌表達系統(tǒng)制備用于夾心ELISA法檢測NT-proBNP的校準品。
2.如權(quán)利要求1所述的基于類彈性蛋白展示N-端腦鈉肽前體雙抗原表位的制備方法，其特征在于：基于人源NT-proBNP氨基酸序列（EMBL-EBI數(shù)據(jù)庫：https://www.ebi.ac.uk/，登入ID: NRP000FB92A，見圖1)設(shè)計的NT-proBNP抗原表位基因，分別編碼NT-proBNP中 第13-20位氨基酸殘基ETSGLQEQ（其中E代表谷氨酸殘基，T代表蘇氨酸殘基，S代表絲氨酸殘基，G代表甘氨酸殘基，L代表亮氨酸殘基，Q代表谷氨酰胺殘基）；所述的NT-proBNP中第63-71位氨基酸殘基GHRKMVLYT（其中G代表甘氨酸殘基，H代表組氨酸殘基，R代表精氨酸殘基，K代表賴氨酸殘基，M代表甲硫氨酸殘基，V代表纈氨酸殘基，L代表亮氨酸殘基，Y代表酪氨酸殘基，T代表蘇氨酸殘基）。
3.如權(quán)利要求1所述的基于類彈性蛋白展示N-端腦鈉肽前體雙抗原表位的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：
（1）將柔鏈（linker）連接的兩個NT-proBNP抗原表位基因和類彈性蛋白ELP通過常規(guī)基因克隆方法克隆到pET28a(+)原核表達載體上，雙抗原表位與ELP之間由柔鏈（Poly N）連接，構(gòu)建為NT-proBNP雙抗原表位基因融合表達載體；
（2）將上一步構(gòu)建的重組蛋白表達載體通過電擊轉(zhuǎn)化成大腸埃希菌表達菌株，并篩選出陽性轉(zhuǎn)化子；
（3）將上一步篩選出的陽性轉(zhuǎn)化子進行誘導(dǎo)表達，再收集菌體，經(jīng)過超聲破碎后，利用ITC方法純化出NT-proBNP雙抗原表位融合蛋白。
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