[發(fā)明專利]一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910685231.3
• 申請(qǐng)日: 2019-07-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110408677A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚生偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州麗納芯生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6809
• 分類號(hào): C12Q1/6809
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：包括以下步驟：

A、將流體裝置以及墊片進(jìn)行清洗，吹干待用；

B、將前后的納米孔分別和墊片，流體裝置組裝在一起；

C、組裝完之后的納米孔芯片分別組成了小腔室；

D、將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個(gè)小腔室內(nèi)；

E、測(cè)量修飾納米孔前后的電流和電壓；

F、在cis面的溶液中加入目標(biāo)堿基的K-ras癌基因片段。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：所述根據(jù)步驟A將流體裝置以及墊片放入帶有蒸餾水的燒杯中，超聲清洗20分鐘，然后取出流體裝置和墊片用洗瓶清洗3-4次，之后氮?dú)獯蹈纱谩?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：所述根據(jù)步驟B將前后的納米孔分別和墊片，流體裝置組裝在一起，在組裝時(shí)，取少量的甲醇溶液置于納米孔芯片的孔口邊緣，降低表面張力浸濕納米孔。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：所述根據(jù)步驟C組裝完之后的納米孔芯片分別組成了兩個(gè)小腔室。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：所述根據(jù)步驟D使用微量注射器將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個(gè)小腔室內(nèi)，讓溶液充滿整個(gè)腔室。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：所述根據(jù)步驟E將一對(duì)AgCl電極一端分別放入兩個(gè)腔室內(nèi)，另一端分別連接到膜片鉗放大器上，測(cè)量修飾納米孔前后的電流和電壓曲線，采樣頻率為100kHz，low-pass-8-pole濾波，整個(gè)測(cè)量過(guò)程都放入法拉第籠內(nèi)屏蔽噪聲。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于：所述根據(jù)步驟F在cis面的溶液中加入目標(biāo)107個(gè)堿基的K-ras癌基因片段；

目堿基連接探針5’-TTTTTTTTTTTTGTCATTATGTGCTGCCATATCTACTTCAGA-3序列)；

寡核苷酸探針?lè)肿油耆パa(bǔ)序列(CGTAGGTACTCCTTAAAGTTAGTATTTTTATATGTAGTTTCTGAAGTAGAT ATGGCAGCACATAATGACATATTTGTACTGCGTGTAGTATCAACAACAGTAACAAA)；

非互補(bǔ)序列(ACATGTCTTATATATTCTTTAAAATTTTCATTTTTATATGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTGCATAAAGTCATATTAGTACTGCGAGTGGTATCTACCACAGTAACAAA)；

a、在野生型基因在密碼子12處存在一個(gè)MvaI酶切位點(diǎn)，用MvaI酶切，Ru(bpy)32+標(biāo)記端與生物素標(biāo)記端被切開(kāi)；

b、測(cè)量突變的K-ras基因和野生型的K-ras基因離子電流的變化。