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[發(fā)明專利]一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法在審

專利信息
申請(qǐng)?zhí)枺?/td> 201910685231.3 申請(qǐng)日: 2019-07-27
公開(kāi)(公告)號(hào): CN110408677A 公開(kāi)(公告)日: 2019-11-05
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 譚生偉 申請(qǐng)(專利權(quán))人: 蘇州麗納芯生物科技有限公司
主分類號(hào): C12Q1/6809 分類號(hào): C12Q1/6809
代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350 代理人: 湯東鳳
地址: 215300 江蘇省蘇州市昆山開(kāi)發(fā)*** 國(guó)省代碼: 江蘇;32
權(quán)利要求書(shū): 查看更多 說(shuō)明書(shū): 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 納米孔 突變型基因 固態(tài)納米 流體裝置 酶切位點(diǎn) 突變檢測(cè) 點(diǎn)突變 結(jié)腸癌 密碼子 墊片 突變 組裝 測(cè)量 芯片 測(cè)量離子電流 電壓反饋控制 電輸出信號(hào) 目標(biāo)堿基 小腔室 野生型 吹干 小腔 修飾 清洗 室內(nèi) 檢測(cè)
【權(quán)利要求書(shū)】:

1.一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:包括以下步驟:

A、將流體裝置以及墊片進(jìn)行清洗,吹干待用;

B、將前后的納米孔分別和墊片,流體裝置組裝在一起;

C、組裝完之后的納米孔芯片分別組成了小腔室;

D、將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個(gè)小腔室內(nèi);

E、測(cè)量修飾納米孔前后的電流和電壓;

F、在cis面的溶液中加入目標(biāo)堿基的K-ras癌基因片段。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟A將流體裝置以及墊片放入帶有蒸餾水的燒杯中,超聲清洗20分鐘,然后取出流體裝置和墊片用洗瓶清洗3-4次,之后氮?dú)獯蹈纱谩?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟B將前后的納米孔分別和墊片,流體裝置組裝在一起,在組裝時(shí),取少量的甲醇溶液置于納米孔芯片的孔口邊緣,降低表面張力浸濕納米孔。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟C組裝完之后的納米孔芯片分別組成了兩個(gè)小腔室。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟D使用微量注射器將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個(gè)小腔室內(nèi),讓溶液充滿整個(gè)腔室。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟E將一對(duì)AgCl電極一端分別放入兩個(gè)腔室內(nèi),另一端分別連接到膜片鉗放大器上,測(cè)量修飾納米孔前后的電流和電壓曲線,采樣頻率為100kHz,low-pass-8-pole濾波,整個(gè)測(cè)量過(guò)程都放入法拉第籠內(nèi)屏蔽噪聲。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于固態(tài)納米孔結(jié)腸癌kras基因突變檢測(cè)方法,其特征在于:所述根據(jù)步驟F在cis面的溶液中加入目標(biāo)107個(gè)堿基的K-ras癌基因片段;

目堿基連接探針5’-TTTTTTTTTTTTGTCATTATGTGCTGCCATATCTACTTCAGA-3序列);

寡核苷酸探針?lè)肿油耆パa(bǔ)序列(CGTAGGTACTCCTTAAAGTTAGTATTTTTATATGTAGTTTCTGAAGTAGAT ATGGCAGCACATAATGACATATTTGTACTGCGTGTAGTATCAACAACAGTAACAAA);

非互補(bǔ)序列(ACATGTCTTATATATTCTTTAAAATTTTCATTTTTATATGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTGCATAAAGTCATATTAGTACTGCGAGTGGTATCTACCACAGTAACAAA);

a、在野生型基因在密碼子12處存在一個(gè)MvaI酶切位點(diǎn),用MvaI酶切,Ru(bpy)32+標(biāo)記端與生物素標(biāo)記端被切開(kāi);

b、測(cè)量突變的K-ras基因和野生型的K-ras基因離子電流的變化。

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