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[發明專利]一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法在審

專利信息
申請號: 201910685231.3 申請日: 2019-07-27
公開(公告)號: CN110408677A 公開(公告)日: 2019-11-05
發明(設計)人: 譚生偉 申請(專利權)人: 蘇州麗納芯生物科技有限公司
主分類號: C12Q1/6809 分類號: C12Q1/6809
代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 代理人: 湯東鳳
地址: 215300 江蘇省蘇州市昆山開發*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 納米孔 突變型基因 固態納米 流體裝置 酶切位點 突變檢測 點突變 結腸癌 密碼子 墊片 突變 組裝 測量 芯片 測量離子電流 電壓反饋控制 電輸出信號 目標堿基 小腔室 野生型 吹干 小腔 修飾 清洗 室內 檢測
【權利要求書】:

1.一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:包括以下步驟:

A、將流體裝置以及墊片進行清洗,吹干待用;

B、將前后的納米孔分別和墊片,流體裝置組裝在一起;

C、組裝完之后的納米孔芯片分別組成了小腔室;

D、將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個小腔室內;

E、測量修飾納米孔前后的電流和電壓;

F、在cis面的溶液中加入目標堿基的K-ras癌基因片段。

2.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:所述根據步驟A將流體裝置以及墊片放入帶有蒸餾水的燒杯中,超聲清洗20分鐘,然后取出流體裝置和墊片用洗瓶清洗3-4次,之后氮氣吹干待用。

3.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:所述根據步驟B將前后的納米孔分別和墊片,流體裝置組裝在一起,在組裝時,取少量的甲醇溶液置于納米孔芯片的孔口邊緣,降低表面張力浸濕納米孔。

4.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:所述根據步驟C組裝完之后的納米孔芯片分別組成了兩個小腔室。

5.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:所述根據步驟D使用微量注射器將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個小腔室內,讓溶液充滿整個腔室。

6.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:所述根據步驟E將一對AgCl電極一端分別放入兩個腔室內,另一端分別連接到膜片鉗放大器上,測量修飾納米孔前后的電流和電壓曲線,采樣頻率為100kHz,low-pass-8-pole濾波,整個測量過程都放入法拉第籠內屏蔽噪聲。

7.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于:所述根據步驟F在cis面的溶液中加入目標107個堿基的K-ras癌基因片段;

目堿基連接探針5’-TTTTTTTTTTTTGTCATTATGTGCTGCCATATCTACTTCAGA-3序列);

寡核苷酸探針分子完全互補序列(CGTAGGTACTCCTTAAAGTTAGTATTTTTATATGTAGTTTCTGAAGTAGAT ATGGCAGCACATAATGACATATTTGTACTGCGTGTAGTATCAACAACAGTAACAAA);

非互補序列(ACATGTCTTATATATTCTTTAAAATTTTCATTTTTATATGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTGCATAAAGTCATATTAGTACTGCGAGTGGTATCTACCACAGTAACAAA);

a、在野生型基因在密碼子12處存在一個MvaI酶切位點,用MvaI酶切,Ru(bpy)32+標記端與生物素標記端被切開;

b、測量突變的K-ras基因和野生型的K-ras基因離子電流的變化。

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