[發明專利]一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法

在審

• 申請號: 201910685231.3
• 申請日: 2019-07-27
• 公開（公告）號: CN110408677A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 譚生偉
• 申請（專利權）人: 蘇州麗納芯生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6809
• 分類號: C12Q1/6809
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：包括以下步驟：

A、將流體裝置以及墊片進行清洗，吹干待用；

B、將前后的納米孔分別和墊片，流體裝置組裝在一起；

C、組裝完之后的納米孔芯片分別組成了小腔室；

D、將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個小腔室內；

E、測量修飾納米孔前后的電流和電壓；

F、在cis面的溶液中加入目標堿基的K-ras癌基因片段。

2.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：所述根據步驟A將流體裝置以及墊片放入帶有蒸餾水的燒杯中，超聲清洗20分鐘，然后取出流體裝置和墊片用洗瓶清洗3-4次，之后氮氣吹干待用。

3.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：所述根據步驟B將前后的納米孔分別和墊片，流體裝置組裝在一起，在組裝時，取少量的甲醇溶液置于納米孔芯片的孔口邊緣，降低表面張力浸濕納米孔。

4.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：所述根據步驟C組裝完之后的納米孔芯片分別組成了兩個小腔室。

5.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：所述根據步驟D使用微量注射器將1M/1M KCl溶液注入到納米孔芯片的兩個小腔室內，讓溶液充滿整個腔室。

6.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：所述根據步驟E將一對AgCl電極一端分別放入兩個腔室內，另一端分別連接到膜片鉗放大器上，測量修飾納米孔前后的電流和電壓曲線，采樣頻率為100kHz，low-pass-8-pole濾波，整個測量過程都放入法拉第籠內屏蔽噪聲。

7.根據權利要求1所述的一種基于固態納米孔結腸癌kras基因突變檢測方法,其特征在于：所述根據步驟F在cis面的溶液中加入目標107個堿基的K-ras癌基因片段；

目堿基連接探針5’-TTTTTTTTTTTTGTCATTATGTGCTGCCATATCTACTTCAGA-3序列)；

寡核苷酸探針分子完全互補序列(CGTAGGTACTCCTTAAAGTTAGTATTTTTATATGTAGTTTCTGAAGTAGAT ATGGCAGCACATAATGACATATTTGTACTGCGTGTAGTATCAACAACAGTAACAAA)；

非互補序列(ACATGTCTTATATATTCTTTAAAATTTTCATTTTTATATGTACTGTCACTAGTTACTTGTGTGCATAAAGTCATATTAGTACTGCGAGTGGTATCTACCACAGTAACAAA)；

a、在野生型基因在密碼子12處存在一個MvaI酶切位點，用MvaI酶切，Ru(bpy)32+標記端與生物素標記端被切開；

b、測量突變的K-ras基因和野生型的K-ras基因離子電流的變化。