[發(fā)明專利]pH值響應(yīng)兩性離子透明質(zhì)酸膠束遞送阿霉素方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910683886.7
• 申請日: 2019-07-26
• 公開（公告）號: CN110585128A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張樹彪;孫姣;趙軼男;周泉;王瑞;鄒禹;付雙
• 申請（專利權(quán)）人: 大連民族大學(xué)
• 主分類號: A61K9/107
• 分類號: A61K9/107;A61K47/36;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 21235 大連智高專利事務(wù)所(特殊普通合伙)
• 代理人: 畢進(jìn)

本發(fā)明屬于兩性離子納米藥物載體與藥物輸送技術(shù)領(lǐng)域，pH值響應(yīng)兩性離子透明質(zhì)酸膠束遞送阿霉素方法及應(yīng)用。通過對納米材料修飾改性，利用腫瘤組織的特異性，以化學(xué)偶聯(lián)或者包封的方式將抗腫瘤藥物包埋到納米藥物載體中，以期能夠?qū)崿F(xiàn)藥物在不同組織間的特異性分布，在達(dá)到高效給藥的目的的同時(shí)降低藥物對正常組織的損傷。本發(fā)明合成了新型的兩性離子納米材料dHAD，通過自組裝形成的pH響應(yīng)性膠束，用于遞送疏水性抗腫瘤藥物阿霉素，在藥物載體領(lǐng)域展現(xiàn)了廣闊的前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于兩性離子納米藥物載體與藥物輸送技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明具體涉及pH值響應(yīng)兩性離子透明質(zhì)酸膠束遞送阿霉素方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)，是一種天然的高分子酸性勃多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性，無毒、無免疫原性的聚合物。其自身的竣基和輕基官能團(tuán)可以通過交聯(lián)或者偶聯(lián)反應(yīng)來化學(xué)修飾。因此，作為靶向配體對于腫瘤治療具有應(yīng)用前景。藥物治療惡性腫瘤依然存在藥物利用率低、選擇性差和多藥耐藥性等問題。

鹽酸表阿霉素(epi-rubicin hydrochloride，EPI，表柔比星)是一種高效、廣譜的蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，作為一種抗癌藥物已被應(yīng)用于臨床，長期的使用可發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如骨髓抑制、心臟毒性和過敏反應(yīng)等，尤其是藥物蓄積引起的劑量依賴性的骨髓抑制、心臟毒性，成為限制其臨床應(yīng)用的主要因素。近年來已開發(fā)出多種降低其不良反應(yīng)方法，如微球、乳劑、脂質(zhì)體等，但仍存在著一些問題，如鹽酸表阿霉素脂質(zhì)體粒徑較大，載藥量較低，不方便工業(yè)化生產(chǎn)。因此迫切需要研究并且開發(fā)針對于腫瘤細(xì)胞進(jìn)行精準(zhǔn)定位、粒徑小、載藥量較高的鹽酸表阿霉素制劑的相關(guān)制備技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，為了解決阿霉素長期的使用可發(fā)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如骨髓抑制、心臟毒性和過敏反應(yīng)等。本發(fā)明提供pH值響應(yīng)兩性離子透明質(zhì)酸膠束遞送阿霉素方法，本發(fā)明制備的透明質(zhì)酸衍生物與阿霉素形成的膠束粒徑較小且粒徑分布均勻。

本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

pH值響應(yīng)兩性離子透明質(zhì)酸膠束遞送阿霉素方法；包括如下步驟：

(1)去乙酰化的透明質(zhì)酸兩性離子多糖dHA的制備：制備反應(yīng)物；100-300mL乙醇對反應(yīng)物進(jìn)行沉淀，并在4℃靜置6h以上；抽濾后得到沉淀，真空干燥24h以上；將中間產(chǎn)物溶于15-25mL冰乙酸中，加入5-15mL碘酸，4℃靜置2h以上，然后加入1-10氫碘酸攪拌15min以上；反應(yīng)液用無水乙醚萃取，然后用去離子水透析，將透析液冷凍干燥，得到去乙酰化的透明質(zhì)酸兩性離子多糖dHA；

(2)pH值響應(yīng)兩性離子的透明質(zhì)酸聚合物dHAD的制備：取去乙酰化的透明質(zhì)酸兩性離子多糖(dHA)溶于去離子水中，然后加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(DMTMM)作為縮合劑，滴加N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)調(diào)節(jié)溶液pH值，-4℃冰浴條件下攪拌2h以上；隨后將反應(yīng)溫度升至室溫，將十二胺溶于四氫呋喃中，緩慢滴加至上述溶液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，室溫反應(yīng)24h以上；將反應(yīng)液透析，凍干，得到pH值響應(yīng)兩性離子的透明質(zhì)酸聚合物dHAD；

(3)通過超聲透析法制備pH值響應(yīng)兩性離子的透明質(zhì)酸聚合物-阿霉素dHAD-DOX載藥膠束：首先，對阿霉素鹽酸鹽(DOX·HCl)進(jìn)行脫鹽處理；將DOX·HCl溶解在3-5mL甲醇中并加入三乙胺(TEA)，在室溫下避光攪拌24h以上，將反應(yīng)溶液在30-50℃下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)并進(jìn)行冷凍干燥，得到脫鹽阿霉素(DOX)；取dHAD聚合物分散在等重量比的PBS緩沖液中，并將DOX溶解在與其等重量比的甲醇中，然后邊攪拌邊將DOX的甲醇溶液緩慢注入聚合物溶液中；將混合溶液置于37℃的恒溫?fù)u床上振蕩4h；將最終的混合溶液通過透析袋(MWCO7000Da)用去離子水透析48h以上，凍干并在4℃下保存。