[發明專利]pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法及應用

在審

• 申請號: 201910683886.7
• 申請日: 2019-07-26
• 公開（公告）號: CN110585128A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 張樹彪;孫姣;趙軼男;周泉;王瑞;鄒禹;付雙
• 申請（專利權）人: 大連民族大學
• 主分類號: A61K9/107
• 分類號: A61K9/107;A61K47/36;A61K31/704;A61P35/00
• 代理公司: 21235 大連智高專利事務所(特殊普通合伙)
• 代理人: 畢進

1.pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，包括如下步驟：

(1)去乙酰化的透明質酸兩性離子多糖dHA的制備：制備反應物；100-300mL乙醇對反應物進行沉淀，并在4℃靜置6h以上；抽濾后得到沉淀，真空干燥24h以上；將中間產物溶于15-25mL冰乙酸中，加入5-15mL碘酸，4℃靜置2h以上，然后加入1-10mL氫碘酸攪拌15min以上；反應液用無水乙醚萃取，然后用去離子水透析，將透析液冷凍干燥，得到去乙酰化的透明質酸兩性離子多糖dHA；

(2)pH值響應兩性離子的透明質酸聚合物dHAD的制備：取去乙酰化的透明質酸兩性離子多糖溶于去離子水中，然后加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鹽酸鹽(DMTMM)作為縮合劑，滴加N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)調節溶液pH值，-4℃冰浴條件下攪拌2h以上；隨后將反應溫度升至室溫，將十二胺溶于四氫呋喃中，緩慢滴加至上述溶液中，在氮氣保護條件下，室溫反應24h以上；將反應液透析，凍干，得到pH值響應兩性離子的透明質酸聚合物dHAD；

(3)通過超聲透析法制備pH值響應兩性離子的透明質酸聚合物-阿霉素dHAD-DOX載藥膠束：首先，對阿霉素鹽酸鹽(DOX·HCl)進行脫鹽處理；將DOX·HCl溶解在3-5mL甲醇中并加入三乙胺(TEA)，在室溫下避光攪拌24h以上，將反應溶液在30-50℃下進行旋轉蒸發并進行冷凍干燥，得到脫鹽阿霉素(DOX)；取dHAD聚合物分散在等重量比的PBS緩沖液中，并將DOX溶解在與其等重量比的甲醇中，然后邊攪拌邊將DOX的甲醇溶液緩慢注入聚合物溶液中；將混合溶液置于37℃的恒溫搖床上振蕩4h；將最終的混合溶液通過透析袋(MWCO7000Da)用去離子水透析48h以上，凍干并在4℃下保存；

所述步驟(1)中制備反應物具體步驟為：稱取透明質酸鈉和硫酸聯氨，隨后加入的水合肼溶液進行溶解，氮氣保護50-70℃反應72h以上；或者為：稱取NaOH，溶于去離子水中，然后加入透明質酸，氮氣保護下65-75℃油浴反應6-12h；NaOH為40％NaOH，透明質酸與NaOH的質量比范圍是1:20-40。

2.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(1)中所述的透明質酸鈉與硫酸聯胺的質量比為2:1，透明質酸鈉與水合肼的質量比為1:30。

3.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(1)中所述的冰乙酸為質量分數為5％的溶液；所述的碘酸的摩爾質量為0.1M。

4.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(1)中所述的乙醇均為-4℃冰乙醇。

5.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(1)中所述的氫碘酸為質量分數為50％的溶液。

6.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(1)中所述的無水乙醚萃取，無水乙醚與反應液的體積比為1:1。

7.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(2)中所述的DMTMM與dHA的摩爾比為1:1；所述步驟(2)中所述的DIPEA調節pH值范圍為7-8；所述步驟(2)中所述的十二胺與dHA的摩爾比為2：1；所述步驟(2)中所述去離子水和四氫呋喃，二者的體積比為1:1。

8.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(3)中脫鹽處理時DOX·HCl與三乙胺的摩爾比為1:1-2；所述步驟(3)中dHAD聚合物與DOX的質量比為10:1。

9.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法，其特征是，所述步驟(1)和(2)中所述的透析，其透析時間均為72h，所述步驟(3)中透析時間為48-72h，每隔6h換一次透析液。

10.如權利要求1所述的pH值響應兩性離子透明質酸膠束遞送阿霉素方法在遞送阿霉素的應用。