[發(fā)明專利]一種基于含磷小分子載體PSS進行目標(biāo)多肽的液相合成方法

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• 申請日: 2019-07-25
• 公開（公告）號: CN110372777A
• 公開（公告）日: 2019-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 欽傳光;晁潔;李海迪;田廣;張子鑫;李東升
• 申請（專利權(quán)）人: 西北工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/30;C07K1/06;C07K1/02;C07F9/32
• 代理公司: 西北工業(yè)大學(xué)專利中心 61204
• 代理人: 王鮮凱

1.一種基于含磷小分子載體PSS進行目標(biāo)多肽的液相合成方法，其特征在于：采用的含磷小分子載體PSS包括多芳基磷酰氧基苯甲醇或亞磷酸酰氧基苯甲醇類化合物及其衍生物，其分子結(jié)構(gòu)通式為：

目標(biāo)多肽的液相合成步驟如下：

步驟1：以含磷小分子載體PSS替代固相多肽合成中的樹脂，在脫水偶聯(lián)劑的作用下與第一個α-氨基被保護的氨基酸PG-AA₁-OH在0～50℃下攪拌反應(yīng)1～3小時，得到生成物A；所述氨基酸與含磷小分子載體PSS的摩爾比為1～3:1；所述脫水偶聯(lián)劑為1︰1摩爾比的脫水偶聯(lián)活化劑和堿性物質(zhì)；

所述第一個α-氨基被保護的氨基酸PG-AA₁-OH中的保護基團PG是：芴甲氧羰基Fmoc-或叔丁氧羰基Boc-，保護酪氨酸PG-AA₁-OH的C-端與PSS的輔助基團連接，生成化合物A為PSS-AA₁-PG；所述AA是指任意氨基酸；

步驟2、分離純化：向生成物A加入極性小的烷烴或醚類溶劑，借助含磷小分子載體PSS在溶劑系統(tǒng)中易結(jié)晶沉淀的特性，將生成物A與其他雜質(zhì)分離；

對分離后的生成物A進行過濾和洗滌或重結(jié)晶操作得到純化的生成物A；

步驟3、脫除N-端PG：將純化的生成物A采用脫PG試劑處理，在10～50℃下攪拌反應(yīng)0.5～2小時得到生成物B為PSS-AA₁-NH₂；

向生成物B加入極性小的烷烴或醚類溶劑，借助含磷小分子載體PSS在溶劑系統(tǒng)中易結(jié)晶沉淀的特性，將生成物B與其他雜質(zhì)分離；

對分離后的生成物B進行過濾和洗滌或重結(jié)晶操作得到純化的生成物B；

步驟4：以純化的含有含磷小分子載體PSS的生成物B作為原料，再與第二個α-氨基被保護的氨基酸PG-AA₂-OH進行偶聯(lián)反應(yīng)；重復(fù)步驟1～步驟3，得到化合物PSS-AA₁-AA₂-NH₂；

以第一次重復(fù)后純化的生成物PSS-AA₁-AA₂-NH₂作為原料，再與第三個α-氨基被保護的氨基酸PG-AA₃-OH進行偶聯(lián)反應(yīng)；重復(fù)步驟1～步驟3，得到化合物PSS-AA₁-AA₂-AA₃-NH₂；

按以上步驟循環(huán)重復(fù)，以第若干n-1次重復(fù)后純化的生成物PSS-AA₁-AA₂-AA₃-XXXXXX-AA_n-1-NH₂作為原料，再與第n個α-氨基被保護的氨基酸PG-AA_n-OH進行偶聯(lián)反應(yīng)；重復(fù)步驟1～步驟3，得到目標(biāo)序列多肽的前體化合物C，PSS-AA₁-AA₂-AA₃-XXXXXX-AA_n-NH₂，即H-AAn-XXXXXX-AA₃-AA₂-AA₁-PSS；

步驟5、側(cè)鏈脫保護與含磷小分子載體PSS輔助基團的剪除：以三氟乙酸的雞尾酒溶液為側(cè)鏈脫保護劑，反應(yīng)條件為5～30℃下，攪拌1～3小時，脫除側(cè)鏈上的保護基團tBu、Boc和Pbf，同時剪除含磷小分子載體PSS輔助基團，經(jīng)分離純化得到目標(biāo)序列多肽的三氟乙酸鹽，TFA*H-AAn-XXXXXX-AA₃-AA₂-AA₁-OH；

所述三氟乙酸的雞尾酒溶液中的組分比例為：TFA/TIPS/H₂O＝95:2.5:2.5；

步驟6、目標(biāo)序列多肽的分離純化：將三氟乙酸鹽通過旋蒸回收，殘留溶液用碳酸氫鈉中和，調(diào)節(jié)pH值至目標(biāo)序列多肽的等電點；用乙酸乙酯萃取，沉淀析出，經(jīng)過濾、乙酸乙酯洗滌、干燥得到純化的目標(biāo)序列的多肽，H-AA_n-XXXXXX-AA₃-AA₂-AA₁-OH。