[發(fā)明專利]一種大麥小孢子的取材方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910673875.0
• 申請(qǐng)日: 2019-07-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110317772B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭桂梅;何婷;李穎波;陳志偉;陸瑞菊;劉成洪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N5/04
• 分類號(hào): C12N5/04
• 代理公司: 上海開(kāi)祺知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31114
• 代理人: 張曉敏;費(fèi)開(kāi)逵

1.一種大麥小孢子的取材方法，包括如下步驟：

1)幼穗取材及預(yù)處理

選取大麥幼穗，其旗葉與倒二葉葉舌的間距為1.1-2.0cm，保留幼穗上部?jī)善~子下的基部1.0-1.5cm，除去葉片，置于2-10℃環(huán)境中低溫預(yù)處理10-30天；

2)收集、純化小孢子

對(duì)幼穗進(jìn)行消毒，將花苞接種至試管中，添加10-15ml提取液，旋切，過(guò)濾；濾液以400-1000r·min^-1速度離心3-7min，重復(fù)1-4次，收集小孢子；

將收集到的小孢子用提取液于23-28℃，黑暗中預(yù)處理1-3天后，再用20-22％麥芽糖純化，將死活細(xì)胞分開(kāi)，收集活的小孢子；

其中，所述的提取液中含有甘露醇50-70g·L^-1，添加CaCl₂0.8-1.5g·L^-1、N-嗎啡乙烷磺酸0.8-1.1g·L^-1和秋水仙堿5-25mg·L^-1，pH 5.6-6.0。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，步驟1)中，將選取的幼穗置于2-5℃環(huán)境中進(jìn)行低溫預(yù)處理。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，步驟1)中，將選取的幼穗低溫預(yù)處理21-30天。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，步驟2)中，將花苞接種至提取液中后放置于0-5℃處理1-2天后再旋切。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，步驟2)中，將收集到的小孢子用提取液于23-25℃黑暗中預(yù)處理2天。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，步驟2)中，所述麥芽糖的濃度為21％。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，步驟2)中，所述的提取液中含有甘露醇60g·L^-1，添加CaCl₂ 1.1g·L^-1、N-嗎啡乙烷磺酸0.976g·L^-1和秋水仙堿20mg·L^-1，pH 5.8。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，所述大麥為適于制作啤酒的大麥材料。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述大麥小孢子的取材方法，其特征在于，所述大麥的品種為花30。