[發(fā)明專利]一種同時(shí)定量檢測(cè)血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910664679.7
• 申請(qǐng)日: 2019-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN110231424B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范欣生;陳葉青;段金廒;彭國(guó)平;朱振華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/04;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 楊海軍

本發(fā)明公開了一種同時(shí)定量檢測(cè)血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法，本發(fā)明運(yùn)用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC?MS/MS)快速同時(shí)檢測(cè)口服雙參平肺顆粒后大鼠血漿中芒果苷、丹參酮IIA、人參皂苷Rg1、丹酚酸B、柚皮苷、甘草苷、隱丹參酮、知母皂苷BII和甘草酸的含量。該方法包括標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制、內(nèi)標(biāo)工作液的配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備、血漿樣品處理和含量測(cè)定。本發(fā)明提供的方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)單快速，符合體內(nèi)生物樣品測(cè)定要求，并能應(yīng)用于雙參平肺顆粒口服給藥后的藥代動(dòng)力學(xué)研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是中成藥體內(nèi)代謝研究技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種能快速同時(shí)定量檢測(cè)血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法。

背景技術(shù)

雙參平肺方是南京中醫(yī)藥大學(xué)范欣生教授優(yōu)選的經(jīng)典名方加減方，由人參、丹參、桑白皮、地骨皮、橘紅、知母、天冬、甘草八味藥組成，制成具有清肺潤(rùn)燥，鎮(zhèn)咳止嘔功效的顆粒劑，用以治療氣陰不足、痰瘀交阻之肺纖維化，臨床療效顯著。

研究發(fā)現(xiàn)，雙參平肺顆粒的主要成分是皂苷類、酚酸類、丹參酮類、黃酮類等化合物。人參皂苷Rg1，丹參酮IIA、隱丹參酮與丹酚酸B，柚皮苷，芒果苷與知母皂苷BII，甘草苷與甘草酸，分別是2015版《中國(guó)藥典》中人參、丹參、橘紅、知母、甘草的質(zhì)控成分，大量文獻(xiàn)對(duì)其藥理活性進(jìn)行了報(bào)道。但關(guān)于口服雙參平肺顆粒后大鼠血漿中這9種成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究還未見報(bào)道。為明確這9種功效成分在體內(nèi)的代謝過程，須建立同時(shí)監(jiān)測(cè)口服雙參平肺顆粒后入血成分的濃度的方法，為雙參平肺顆粒的后續(xù)研究提供可靠依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是提供一種定量檢測(cè)血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法，具體采用乙酸乙酯一步萃取法進(jìn)行血漿前處理，選用多潘立酮單一內(nèi)標(biāo)，運(yùn)用UPLC-MS/MS正負(fù)離子快速切換分析模式快速同時(shí)完成血漿中雙參平肺顆粒主要活性成分的檢測(cè)方法。并應(yīng)用本發(fā)明方法開展藥代動(dòng)力學(xué)研究。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種同時(shí)定量檢測(cè)血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液的配制

分別精密稱取人參皂苷Rg1、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮IIA、芒果苷、知母皂苷BII、柚皮苷、甘草苷、甘草酸各10mg，分別置于10ml容量瓶中，加適量甲醇超聲溶解，并定容至刻度線，分別制得1.00mg/ml標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液；

(2)內(nèi)標(biāo)工作液的配制

精密稱取多潘立酮1mg于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，并定容配成0.1mg/mL儲(chǔ)備液；精密移取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋，配成濃度為0.1μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液；

(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

用大鼠空白血漿，將步驟(1)的各標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液配制成7個(gè)終濃度的系列血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品：人參皂苷Rg11.3-650ng/mL；丹酚酸B 5.0-2495ng/mL；隱丹參酮4.5-2250ng/mL；丹參酮IIA 2.0-1000ng/mL；芒果苷4.5-2250ng/mL；知母皂苷BII5.0-2250ng/mL；柚皮苷5.0-2497.5ng/mL；甘草苷2.5-1252.5ng/mL；甘草酸1.5-751.2ng/mL；

分別取各系列血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品，加入步驟(2)的內(nèi)標(biāo)物和甲酸，混勻，加入乙酸乙酯提取，離心，取上清液在離心濃縮儀上揮干，殘?jiān)眉状紡?fù)溶，離心，取上清液注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法中進(jìn)行分析；以待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比值(Y)為縱坐標(biāo)，以待測(cè)物濃度(X)為橫坐標(biāo)，采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸計(jì)算，得各標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算權(quán)重為1/X²；

(4)血漿樣品處理：