[發明專利]一種同時定量檢測血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法

有效

• 申請號: 201910664679.7
• 申請日: 2019-07-23
• 公開（公告）號: CN110231424B
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 范欣生;陳葉青;段金廒;彭國平;朱振華
• 申請（專利權）人: 南京中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/04;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 楊海軍

1.一種同時定量檢測血漿中雙參平肺顆粒主要成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）標準品儲備液的配制

分別精密稱取人參皂苷Rg1、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮IIA、芒果苷、知母皂苷BII、柚皮苷、甘草苷、甘草酸各10mg，分別置于10ml容量瓶中，加適量甲醇超聲溶解，并定容至刻度線，分別制得1.00mg/ml標準品儲備液；

（2）內標工作液的配制

精密稱取多潘立酮1mg于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解，并定容配成0.1mg/mL儲備液；精密移取內標儲備液適量，用甲醇稀釋，配成濃度為0.1μg/mL的內標溶液；

（3）標準曲線的制備

用大鼠空白血漿，將步驟（1）的各標準品儲備液配制成7個終濃度的系列血漿標準曲線樣品：人參皂苷Rg1 1.3-650ng/mL；丹酚酸B 5.0-2495ng/mL；隱丹參酮4.5-2250ng/mL；丹參酮IIA 2.0-1000ng/mL；芒果苷4.5-2250ng/mL；知母皂苷BII 5.0-2250ng/mL；柚皮苷5.0-2497.5ng/mL；甘草苷2.5-1252.5 ng/mL；甘草酸1.5-751.2ng/mL；

分別取各系列血漿標準曲線樣品，加入步驟（2）的內標物，并加入甲酸，混勻，加入乙酸乙酯提取，離心，取上清液在離心濃縮儀上揮干，殘渣用甲醇復溶，離心，取上清液注入液相色譜串聯質譜法中進行分析；以待測物與內標的峰面積之比值Y為縱坐標，以待測物濃度X為橫坐標，采用加權最小二乘法進行回歸計算，得各標準曲線，計算權重為1/X²；

（4）血漿樣品處理：

取灌胃雙參平肺顆粒的大鼠待測血漿樣品，加入步驟（2）的內標物，并加入甲酸，渦旋混勻，加入乙酸乙酯超聲提取5min，13000rpm離心10min，取上清液在離心濃縮儀上揮干，殘渣用70%甲醇復溶，超聲2min，13000rpm離心10min，取上清液作為血漿測試樣品；

（5）含量測定：

取步驟(4)得到的血漿測試樣品進樣，采用液相色譜串聯質譜法進行分析，記錄各待測成分和內標的峰面積，代入步驟（3）制得的回歸方程中，檢測血漿中芒果苷、丹參酮IIA、人參皂苷Rg1、丹酚酸B、柚皮苷、甘草苷、隱丹參酮、知母皂苷BII和甘草酸的含量；

液相色譜條件為：ACQUITY^TM UPLC超高效液相色譜系統，ACQUITY^TM UPLC BEH C18色譜柱，規格：2.1mm×100mm, 填料直徑：1.7μm，柱溫：35℃;流動相：0.1%甲酸水溶液為A相，乙腈為B相，梯度洗脫：0-1min，10%→30%B；2-7min，30%B→95%B；7-8.2min, 95%→10%B，流速為0.4mL/min，進樣體積為5μL，檢測時間為8min；

質譜條件為：Xevo^TM TQ質譜系統，離子源ESI源，掃描方式為多反應監測MRM方式，毛細管電壓3kV，離子源溫度150℃，去溶劑氣溫度550℃；

MRM監測掃描方式為：

芒果苷：離子化方式：ESI⁺，定量離子對423.22→273.10，錐孔電壓：30V，碰撞能量：28eV，保留時間(t_R)：2.16min；

丹參酮IIA：離子化方式：ESI⁺，定量離子對295.22→277.22，錐孔電壓：28V，碰撞能量：20eV，保留時間(t_R)：5.82min；

人參皂苷Rg1：離子化方式：ESI^-，定量離子對845.53→799.49，錐孔電壓：80V，碰撞能量：35eV，保留時間(t_R)：2.91min；

丹酚酸B：離子化方式：ESI^-，定量離子對717.28→519.16，錐孔電壓：26V，碰撞能量：18eV，保留時間(t_R)：3.08min；

柚皮苷：離子化方式：ESI^-，定量離子對579.29→271.12，錐孔電壓：40V，碰撞能量：28eV，保留時間(t_R)：2.89min；

甘草苷：離子化方式：ESI⁺，定量離子對419.16→136.94，錐孔電壓：28V，碰撞能量：20eV，保留時間(t_R)：2.64min；

隱丹參酮：離子化方式：ESI⁺，定量離子對297.16→251.11，錐孔電壓：30V，碰撞能量：26eV，保留時間(t_R)：5.54min；

知母皂苷BII：離子化方式：ESI^-，定量離子對919.58→757.51，錐孔電壓：85V，碰撞能量：40eV，保留時間(t_R)：2.90min；

甘草酸：離子化方式：ESI⁺，定量離子對823.35→453.35，錐孔電壓：18V，碰撞能量：30eV，保留時間(t_R)：3.91min；

內標物為多潘立酮：離子化方式：ESI⁺，定量離子對426.16→175.09，錐孔電壓：75V，碰撞能量：35eV，保留時間(t_R)：3.18min。