[發明專利]一種超高壓協同抗菌劑對食品中單增李斯特菌的滅活方法

在審

• 申請號: 201910664007.6
• 申請日: 2019-07-22
• 公開（公告）號: CN110353154A
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發明（設計）人: 王海翔;朱華;王歲樓;綦國紅;曹崇江
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: A23L5/20
• 分類號: A23L5/20;C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

本發明公開了一種超高壓協同抗菌劑對食品中單增李斯特菌的滅活方法，包括如下步驟：(1)配制LB1、LB2液體培養基；(2)單增李斯特菌的接種與活化：將單增李斯特菌由斜面培養基接種至LB1液體培養基中培養，得LB1菌液，取LB1菌液加到LB2液體培養基中培養，得LB2菌液；(3)超高壓處理：分別向單增李斯特菌菌液中加入抗菌劑，獲得單增李斯特菌菌懸液，將懸液真空無菌密封，進行超高壓處理；(4)計數：將超高壓處理后的單增李斯特菌進行培養計數。本發明極大地提高了滅活效果，亞致死損傷率低至15.24％，致死率高達100％，實現對單增李斯特菌的亞致死狀態的控制，且能降低處理壓力。

技術領域

本發明涉及滅菌方法，特別涉及一種超高壓協同抗菌劑對食品中單增李斯特菌的滅活方法。

背景技術

傳統食品工業一般采用熱殺菌技術，但熱處理過程中會破壞一些食品的天然風味和口感，并導致營養物質的損失。超高壓技術作為一種非熱殺菌技術，不僅能有效滅活食品中的單增李斯特菌(L.monocytogenes)，還能較好的保持食品原有的天然風味、口感和色澤，并減少營養物質的損失。但受到高壓脅迫作用的單增李斯特菌會出現一種亞致死損傷的狀態，其在適宜的環境下能完成修復，顯示出致病性，對食品安全構成了潛在的危害。

發明內容

發明目的：本發明目的是提供超高壓協同抗菌劑對食品中單增李斯特菌的滅活方法。

技術方案：本發明提供一種超高壓協同抗菌劑對食品中單增李斯特菌的滅活方法，包括如下步驟：

(1)配制LB1、LB2液體培養基：稱取李氏增菌肉湯LB1和LB2基礎溶于蒸餾水中，加熱至完全溶解，高壓蒸汽滅菌，備用；向上述處理后的LB1基礎中無菌加入萘啶酮酸和吖啶黃素，制成LB1液體培養基，向上述處理后的LB2基礎中無菌加入萘啶酮酸和吖啶黃素，制成LB2液體培養基，備用；

(2)單增李斯特菌的接種與活化：將單增李斯特菌由斜面培養基接種至LB1液體培養基中培養，得LB1菌液，取LB1菌液加到LB2液體培養基中培養，得LB2菌液；

(3)超高壓處理：分別向單增李斯特菌菌液中加入肉桂醛、二甲基二碳酸鹽、乳酸鏈球菌素，獲得單增李斯特菌菌懸液，將懸液真空無菌密封，進行超高壓處理；

(4)計數：將超高壓處理后的單增李斯特菌進行培養計數。

進一步地，所述步驟(4)計數培養中采用的非選擇性培養基為TSA-YE平板培養基。采用TSA-YE培養基有利于單增李斯特菌的生長于修復，提高計數的效率。

進一步地，所述TSA-YE平板培養基的配制方法為：稱取含0.6％酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂于蒸餾水中，加熱至完全溶解，高壓蒸汽滅菌，即可。對培養基進行滅菌，造成無菌狀態，排除對實驗結果的干擾。TSA-YE培養基是非選擇性培養基，受損的和正常的單增李斯特菌都能在此培養基上生長。

進一步地，所述步驟(4)計數培養中采用的選擇性培養基為PALCAM培養基。PALCAM培養基是選擇性培養基，受損的單增李斯特菌不能在此培養基上生長。對非目標菌的抑制性佳，選擇性靈敏度最高，利于計數分析。

進一步地，所述PALCAM培養基的配制方法為：稱取PALCAM培養基基礎于蒸餾水中，加熱至完全溶解，高壓蒸汽滅菌，再無菌加入PALCAM選擇性添加劑。PALCAM培養基由于加了選擇性添加劑(鹽酸吖啶黃素、硫酸多粘菌素B、復達欣)，受損單增李斯特菌不能在此培養基上生長。PALCAM是單增李斯特菌選擇性分離的理想培養基。

進一步地，所述步驟(4)超高壓處理中升壓時間不超過3min，泄壓時間不超過1min。

進一步地，所述步驟(4)高壓處理后的單增李斯特菌置于冰上待測。置于冰上是為了制造低溫狀態，保證樣品的原始狀態。