[發明專利]霍山石斛組培苗培育及煉苗方法

在審

• 申請號: 201910658866.4
• 申請日: 2019-07-22
• 公開（公告）號: CN110214702A
• 公開（公告）日: 2019-09-10
• 發明（設計）人: 李靜婷;朱濤;李文建
• 申請（專利權）人: 平頂山學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;A01G24/28;A01G24/22;A01G24/10
• 代理公司: 鄭州金成知識產權事務所(普通合伙) 41121
• 代理人: 郭增欣

本發明涉及一種農業種植技術。一種霍山石斛組培苗培育及煉苗方法，包括：1）無菌種子混合液制備與原球莖誘導，用無菌滴管吸適量種子混合液，逐一滴入誘導培養基中，培養18?22天，獲得小圓形顆粒狀原球莖；2）將原球莖分散轉接至增殖培養基中，培養18?30天，獲得大量原球莖；3）將增殖培養獲得的原球莖，轉接在分化培養基中，培養35?40天，讓其分化形成根、莖、葉俱全的幼苗；4）把幼苗轉接到壯苗與生根培養基中，培養80?90天，獲得大量的健壯組培苗；5）當霍山石斛組培苗長出4～6片真葉，苗高5～7cm，單株根數3條以上，且根系完好，即可進行煉苗。本發明培育的組培苗長勢健壯，移栽成活率高，性狀優良穩定，對促進霍山石斛規模化和產業化種植，具有重要的技術指導作用。

技術領域

本發明涉及農業種植技術，尤其是涉及一種霍山石斛組培苗及煉苗方法。

背景技術

霍山石斛(Dendrobium huoshanense)屬蘭科石斛屬多年生附生草本植物，分布于安徽霍山、河南南召。又稱霍斛、米斛，為中藥石斛的上品，位于九大仙草之首，素有“千金草、軟黃金”之稱。

近來研究表明，霍山石斛含有的多種生物堿、石斛多糖、毛蘭素等生物活性物質，不僅具有清音潤喉、滋陰清肺、生津止渴之功效，還有軟化血管、降血壓、抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫力等作用。中國科技大學、中山醫科大學研究表明:“霍山石斛具有增強 T 細胞、B 細胞、NK 細胞和巨噬細胞的作用，對抑制腫瘤和降血糖有非常好的療效”。

天然霍山石斛生長在云霧繚繞的懸崖峭壁石縫間，因種子無胚乳，在自然條件下，萌發率極低，又加之生長條件極為苛刻、生長特慢，藥效顯著而價格昂貴，市場需求量大，導致了人們長期地瘋狂采挖，現已頻臨滅絕。天然的霍山石斛喜潮濕，忌積水；喜光怕暴曬；喜空氣流通忌悶捂；喜溫暖忌寒又怕高溫，5℃以下、30℃以上停止生長。

當前，霍山石斛人工栽培產業在全國范圍內剛剛起步，然而，由于霍山石斛對生境苛求，獲種苗困難，采用傳統的扦插、分株等方法進行繁殖，周期長，增繁系數極低。即使有人工培育組培苗及煉苗，也存在著組培苗生長慢、苗瘦、玻璃化嚴重及煉苗時易污染、死亡率高和生長遲緩等難題，極大地制約了霍山石斛大規模的產業化發展。

因此，為保護霍山石斛野生資源，變野生為栽培種，推動霍山石斛的產業化發展，急需優化的霍山石斛組培苗培育及煉苗方法。

發明內容

本發明提出一種優化的霍山石斛組培苗培育及煉苗方法，以彌補霍山石斛種子難萌發、優而壯苗難培育、煉苗難成活及長勢弱等技術難題，為挽救瀕臨滅絕的珍稀藥材—霍山石斛，提供了規模化、標準化、產業化生產的科學技術依據。

本發明采用的技術方案：

本發明霍山石斛組培苗的培育及煉苗方法，包含步驟如下：

（1）無菌種子混合液制備與原球莖誘導

對霍山石斛稍泛黃、未開裂的飽滿成熟果實進行常規消毒處理，把處理后的霍山石斛果實用無菌刀切開，將種子抖入適量的無菌水中搖勻，制成無菌種子混合液。配制誘導培養基：1/2M S+6-BA 0.6m g/L+NAA0.4m g/L+土豆汁20g/ L +蔗糖30g/ L +瓊脂7g/ L ，PH為5.8。用無菌滴管吸適量種子混合液。逐一滴入誘導培養基中，進行培養，在溫度為23～26℃、光照時間10～12 h/d、光照強度1600 Lx～2000 Lx的條件下，培養18～22d，獲得原球莖；

（2）增殖培養

制備增殖培養基：M S+2，4-D 0.2m g/L+NAA0.4m g/L+土豆汁20g/ L +蔗糖30g/ L +瓊脂7g/ L ，PH為5.8。將誘導獲得的原球莖分散轉接至增殖培養基中，溫度為24～26 ℃、光照時間12 h/d、光照強度2000 Lx～2500 Lx的條件下，培養30天，獲得大量原球莖；