[發(fā)明專利]一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發(fā)酵方法及制劑的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910658413.1
• 申請日: 2019-07-22
• 公開（公告）號: CN110699259A
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王喜剛;郭成瑾;沈瑞清;焦楊;張麗榮;楊波
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護研究所(寧夏植物病蟲害防治重點實驗室);河西學(xué)院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/38;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 11531 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 李宏偉

本發(fā)明涉及一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發(fā)酵方法及制劑的制備方法，其步驟為斜面培養(yǎng)、種子液培養(yǎng)、液體發(fā)酵、制劑制備，制備的制劑劑型為液體制劑或可濕性粉劑。本發(fā)明在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中加入中藥浸提物，發(fā)酵結(jié)束后或?qū)l(fā)酵產(chǎn)物直接處理后包裝為液體制劑，或進行干燥分離，得到哈茨木霉菌絲體，再將浸提后的中藥藥渣干燥后粉碎，作為載體與菌絲體混合制成固體制劑，該液體制劑或固體制劑對木賊鐮刀菌、接骨木鐮刀菌、尖孢鐮菌、茄病鐮刀菌、銳頂鐮刀菌等馬鈴薯根腐病的致病菌均有很好的抑制效果，可以應(yīng)用于馬鈴薯根腐病的防治過程，從而減少和防治馬鈴薯根腐病的發(fā)生，提高馬鈴薯的產(chǎn)量和質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發(fā)酵方法及制劑的制備方法。

背景技術(shù)

哈茨木霉菌作為一種生防菌可以用來預(yù)防由腐霉菌、立枯絲核菌、鐮刀菌、黑根霉、柱孢霉、核盤菌、齊整小核菌等病原菌引起的植物病害。其中由鐮刀菌侵染馬鈴薯引起的根腐病、干腐病、枯萎病是世界性的土傳真菌病害，馬鈴薯根腐病在育苗期和大田生長期均可發(fā)病，由多種鐮刀菌引起的馬鈴薯鐮刀菌根腐病近幾年對馬鈴薯的生產(chǎn)危害嚴重，一般發(fā)病地塊減產(chǎn)13％～35％，嚴重的成片死亡甚至絕產(chǎn)。馬鈴薯根腐病的防治一般采用化學(xué)殺菌劑進行處理，用化學(xué)藥劑處理時往往存在殘留問題，同時生產(chǎn)田中的鐮刀菌不能除根，來年易復(fù)發(fā)等，因此使用哈茨木霉進行生物防治根腐病處理，環(huán)保安全有效，可進行長期防治。

目前國外已有10余個商品化的木霉制劑問世，多為木霉孢子制劑，但木霉菌在植物病害防治中仍然存在很多問題，施用后在土壤中受溫度、濕度、pH等因素影響，定殖能力不夠理想，難以充分發(fā)揮藥效，并且木霉菌對植物的促生增產(chǎn)作用不夠顯著。

針對以上不足，國內(nèi)外進行了多項研究，專利CN201811550295.4公開了一種哈茨木霉菌固體發(fā)酵方法、固體發(fā)酵產(chǎn)物、哈茨木霉菌劑及其制備方法和應(yīng)用，能高效地防治葡萄霜霉病和葡萄灰霉病，還能有效促進葡萄生長和提高作物產(chǎn)量。專利CN200810154241.6公開了一種用中草藥藥渣發(fā)酵生防木霉的生產(chǎn)工藝，使用中藥廠制藥過程中的中藥藥渣作為培養(yǎng)基成分的一部分進行發(fā)酵生產(chǎn)生防木霉，以上兩個專利均沒有說明其得到的生防木霉活力如何，以及解決木霉發(fā)酵過程產(chǎn)量的問題，在生產(chǎn)上效果如何，對相關(guān)植物疾病的防治及促進增產(chǎn)作用不明顯。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發(fā)酵方法及制劑的制備方法，該方法通過液體發(fā)酵可以顯著提高哈茨木霉的產(chǎn)量，同時制備的制劑對木賊鐮刀菌、接骨木鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌、銳頂鐮刀菌等馬鈴薯根腐病的致病菌有很好的抑制效果，可以應(yīng)用于馬鈴薯根腐病的防治過程，從而減少和防治馬鈴薯根腐病的發(fā)生，提高馬鈴薯的產(chǎn)量和質(zhì)量。

本發(fā)明所用的菌種哈茨木霉菌M-17，保藏編號：CCTCC NO：M2018538，拉丁文名稱為 Trichoderma harzianum M-17，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2018年8 月13日，保藏地址為中國武漢武漢大學(xué)。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發(fā)酵方法，包括以下步驟：

步驟一、斜面培養(yǎng)，將哈茨木霉出發(fā)菌株M-17菌種接種到PDA培養(yǎng)基斜面上進行培養(yǎng)；

步驟二、種子液培養(yǎng)，將步驟一培養(yǎng)好的斜面菌種接種到滅菌的種子培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)；

步驟三、液體發(fā)酵，將步驟二培養(yǎng)好的種子液接種到滅菌的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，得到哈茨木霉發(fā)酵物；

步驟四、制劑制備，將步驟三發(fā)酵結(jié)束的液體發(fā)酵液制備成液體制劑或固體制劑。

為了更好的實現(xiàn)本發(fā)明，進一步的，步驟一中PDA培養(yǎng)基制作方法為：

1)先按以下配比稱取培養(yǎng)基各組分：去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000ml；