[發明專利]一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發酵方法及制劑的制備方法

在審

• 申請號: 201910658413.1
• 申請日: 2019-07-22
• 公開（公告）號: CN110699259A
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發明（設計）人: 王喜剛;郭成瑾;沈瑞清;焦楊;張麗榮;楊波
• 申請（專利權）人: 寧夏農林科學院植物保護研究所(寧夏植物病蟲害防治重點實驗室);河西學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/38;A01P3/00;C12R1/885
• 代理公司: 11531 北京匯捷知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 李宏偉

1.一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉液體發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一、斜面培養，將哈茨木霉出發菌株M-17菌種接種到PDA培養基斜面上進行培養；

步驟二、種子液培養，將步驟一培養好的斜面菌種接種到滅菌的種子培養基中進行培養；

步驟三、液體發酵，將步驟二培養好的種子液接種到滅菌的液體發酵培養基中進行培養，得到哈茨木霉發酵物；

步驟四、制劑制備，將步驟三發酵結束的液體發酵液制備成液體制劑或固體制劑。

2.根據權利要求1所述的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉的液體發酵方法，其特征在于，步驟一中PDA培養基制作方法為：

1)先按以下配比稱取培養基各組分：去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15～20g，蒸餾水1000ml；

2)土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20～30min，用2層紗布趁熱根據權利要求1所述的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉的液體發酵方法，其特征在于，步驟在量杯上過濾，濾渣棄取，濾液補充蒸餾水分到1000ml；

3)把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g，然后放在石棉網上，小火加熱，并用玻棒不斷攪拌，待瓊脂完全溶解后，進行分裝，121℃滅菌25～30min后自然冷卻倒斜面和平板，凝固后備用。

3.根據權利要求1所述的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉的液體發酵方法，其特征在于，步驟一斜面培養條件為黑暗條件下，25～28℃培養5～7d。

4.根據權利要求1所述的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉的液體發酵方法，其特征在于，步驟二中種子培養基為蔗糖15～20g/L，酵母粉3～6g/L，NaCl 0.01～0.05g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1～0.3g/L，MgSO₄·7H₂O 1.2～1.5g/L，KH₂PO₄ 3.5～4.5g/L，NaNO₃ 6.5～7.0g/L；培養基濕熱滅菌條件為121℃，25～30min；接種量為1～2cm²斜面孢子；培養條件為黑暗條件下在搖床25～28℃培養3～6d，搖床轉速180～220rpm。

5.根據權利要求1所述的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉的液體發酵方法，其特征在于，步驟三中液體發酵培養基為碳源添加量為2％的小麥粉、玉米粉、馬鈴薯全粉、馬鈴薯淀粉、可溶性淀粉和麩皮粉中的一種或幾種；氮源添加量為2％的黃豆粉、葡萄酒皮渣粉、硝酸銨、尿素、硫酸銨和硝酸鈉中的一種或幾種；其他微量元素添加量為1.4％的硫酸鎂、硝酸鈣、硫酸亞鐵中的一種或幾種；生長促進劑為甘草和板藍根浸出液中的一種或幾種，濃度分別為30％、50％、70％。

6.根據權利要求1所述的一種用于防控馬鈴薯根腐病的哈茨木霉的液體發酵方法，其特征在于，步驟三中液體發酵培養基滅菌參數為蒸汽濕熱滅菌，121～124℃維持25～35min，培養條件為25～28℃培養，通風比1:0.7v/v，開攪拌90～115rpm，培養10～13d。