[發明專利]一種表達BVDV-E0的重組牛腸道病毒的構建方法與初步應用有效
| 申請號： | 201910654523.0 | 申請日： | 2019-07-19 |
| 公開（公告）號： | CN110452889B | 公開（公告）日： | 2021-07-27 |
| 發明（設計）人： | 侯紹華;任肖;賈紅;張姍;姜一曈 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/66;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467 | 代理人： | 董柏雷 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 bvdv e0 重組 腸道病毒 構建 方法 初步 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種表達牛病毒性腹瀉病毒E0基因的BEV重組病毒，其特征在于：所述BEV重組病毒為BEV BJ101株的感染性克隆毒株，BEV BJ101株的全基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述感染性克隆毒株是通過反向遺傳操作的方法獲得BEV BJ101毒株的全長cDNA克隆并獲得拯救毒株rBEV后，將優化后的牛病毒性腹瀉病毒E0序列插入到BEV全長cDNA的非結構蛋白2C和3A之間，獲得可穩定表達外源基因E0的重組牛腸道病毒，所述優化后的牛病毒性腹瀉病毒E0序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根據權利要求1所述的一種表達牛病毒性腹瀉病毒E0基因的BEV重組病毒,其特征在于:所述牛病毒性腹瀉病毒E0基因的優化包括，對E0基因序列先進性哺乳動物密碼子優化，再在其5’端添加合成GCCGGCCGC NotI酶切位點序列，在其3’端添加合成TCTAGA XbaI酶切位點序列，以便于通過NotI、XbaI雙酶切后與引入NotI、XbaI雙酶切位點的GpBSK-rBEV的質粒進行連接，所述GpBSK-rBEV質粒為插入全長BEV BJ101全基因序列的GpBSK重組載體。
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