[發(fā)明專(zhuān)利]一種Ube3a基因在Iso誘導(dǎo)的心肌肥大中的作用機(jī)制的研究方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910649672.8
• 申請(qǐng)日: 2019-07-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110317831A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李延飛;金月玲;李覺(jué);王翠平;葉駿
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海健康醫(yī)學(xué)院;同濟(jì)大學(xué);上海美湛生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/861
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/861;C12Q1/6883;G01N33/68
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;王永偉

本發(fā)明涉及心臟醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，且公開(kāi)了一種Ube3a基因在Iso誘導(dǎo)的心肌肥大中的作用機(jī)制的研究方法，通過(guò)細(xì)胞分組、Ube3a基因的獲取、Ube3a腺病毒的包裝、轉(zhuǎn)染以及數(shù)據(jù)分析等步驟來(lái)觀察Ube3a在Iso誘導(dǎo)心肌肥大的過(guò)程中表達(dá)量的變化情況，判斷Ube3a是否與心肌肥大的發(fā)生有關(guān)連作用，然后通過(guò)Ube3a基因的敲除，確定Ube3a在心肌肥大發(fā)生過(guò)程中的特異性以及Ube3a對(duì)心肌肥大是促進(jìn)還是阻止作用；通過(guò)Ube3a基因的過(guò)表達(dá)作用，進(jìn)一步明確Ube3a的促進(jìn)或者阻止作用，并結(jié)合Ube3a敲除和過(guò)表達(dá)后細(xì)胞的發(fā)展?fàn)顩r，確定Ube3a的作用和心肌細(xì)胞肥大之間的因果關(guān)系。通過(guò)本研究方法確定Ube3a基因能夠抑制Iso誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大，而且MMP?9蛋白參與了這一分子機(jī)制，為心肌肥大的預(yù)防和治療提供了新的靶基因。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及心臟醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種be3a基因在Iso誘導(dǎo)的心肌肥大中的作用機(jī)制的研究方法。

背景技術(shù)

20世紀(jì)80年代泛素蛋白酶體途徑(the ubiquitin proteasome pathway，UPP)的發(fā)現(xiàn)是闡明細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解作用里程碑的事件，UPP在細(xì)胞的周期調(diào)控、DNA修復(fù)、凋亡、免疫應(yīng)答、抗原加工、神經(jīng)發(fā)育、突觸可塑性、肌肉萎縮、激素調(diào)節(jié)、應(yīng)激反應(yīng)和老化等方面都起到一定的功能。E3泛素連接酶決定著 UPP反應(yīng)的高效性和精確的選擇性。E3連接酶參與著細(xì)胞內(nèi)絕大多數(shù)蛋白的正常降解，調(diào)控著細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)的合成和降解的平衡，一旦受到阻礙，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生一系列的應(yīng)激反應(yīng)，甚至導(dǎo)致組織和器官的損傷。

E3泛素連接酶分為三大類(lèi)：HECT(homologous to E6AP carboxyl terminus)結(jié)構(gòu)域家族、Ring結(jié)構(gòu)域家族和U-box結(jié)構(gòu)域家族。僅人類(lèi)的HECT結(jié)構(gòu)域家族有超過(guò)100種連接酶，Ube3a是其中的一員。關(guān)于Ube3a，研究最廣泛、最深入的是在天使人綜合癥領(lǐng)域。其實(shí)Ube3a與其他疾病的關(guān)系也屢見(jiàn)報(bào)道，早在1999年J Veenstra-Vander Weele就報(bào)道稱(chēng)Ube3a基因的突變能夠?qū)е伦蚤]癥的發(fā)生，隨后Ube3a與許多組織和器官疾病的研究不斷被證實(shí)，這些組織包括腦、乳腺、子宮頸、淋巴等，但是Ube3a與心臟疾病方面的研究很少。Ube3a編碼區(qū)序列全長(zhǎng)約為2.6kb,位于染色體15q11–q13，分為三個(gè)轉(zhuǎn)錄本，可編碼三種壓型蛋白，分別為98.9kDa、101.1kDa和101.7kDa蛋白，而且這三種蛋白均具有蛋白降解的作用。經(jīng)過(guò)對(duì)Gene Expression Omnibus(GEO)數(shù)據(jù)庫(kù)中的心血管疾病相關(guān)的基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行信息學(xué)方法的分析和篩選，確認(rèn)Ube3a與心肌肥大和心力衰竭極有可能存在關(guān)系。