[發(fā)明專利]靶向三陰性乳腺癌的納米粒子摻雜RNA水凝膠的制備及應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910648136.6 | 申請(qǐng)日： | 2019-07-18 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110327464A | 公開（公告）日： | 2019-10-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李雪梅;劉霄凡;丁來(lái)榮;張書圣 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 臨沂大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A61K41/00 | 分類號(hào)： | A61K41/00;A61K9/06;A61K31/704;A61K31/7088;A61K47/54;A61P35/00;A61P15/14 |
| 代理公司： | 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 胡文莉 |
| 地址： | 276005 *** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 水凝膠 靶向 納米粒子摻雜 三陰性乳腺癌 轉(zhuǎn)錄 聚陰離子 滾環(huán) 制備 藥物緩釋體系 乳腺癌細(xì)胞 生物相容性 癌癥轉(zhuǎn)移 過(guò)程產(chǎn)生 納米粒子 穩(wěn)定膠體 抑制生長(zhǎng) 腫瘤細(xì)胞 電負(fù)性 聚集體 陽(yáng)離子 正電性 引入 對(duì)靶 可用 位點(diǎn) 副本 粒子 復(fù)發(fā) 應(yīng)用 復(fù)制 協(xié)同 細(xì)胞 治療 | ||
1.用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA水凝膠載體，其特征在于，包括：
(1)由直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板通過(guò)滾環(huán)轉(zhuǎn)錄形成的RNA水凝膠，
(2)RNA水凝膠上具有治療型基因microRNA-182和microRNA-205。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的RNA水凝膠載體，其特征在于，所述直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。
3.權(quán)利要求1或2所述的RNA水凝膠載體的制備方法，其特征在于，首先設(shè)計(jì)直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板，直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板中設(shè)計(jì)了microRNA-182和microRNA-205的反義序列，通過(guò)滾環(huán)轉(zhuǎn)錄的方式形成純RNA體系的水凝膠載體。
4.權(quán)利要求1或2所述的RNA水凝膠載體的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：
(1)直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板與T7啟動(dòng)子以相同濃度進(jìn)行退火處理；
(2)加入T4連接酶及T4連接酶緩沖液，19℃維持13h，形成RNA轉(zhuǎn)錄模板；
(3)加入T7聚合酶，rNTP，T7聚合酶緩沖液及TM緩沖液在37℃下維持5h，形成多副本的RNA水凝膠載體。
5.用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA水凝膠復(fù)合物，其特征在于，包括：
(1)由直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板通過(guò)滾環(huán)轉(zhuǎn)錄形成的RNA水凝膠；
(2)RNA水凝膠上具有治療型基因microRNA-182和microRNA-205；
(3)RNA水凝膠上具有核酸適體、CpG片段和DOX；
(4)通過(guò)靜電作用粘連的膠體MnO2@Ce6陽(yáng)離子納米粒子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的RNA水凝膠復(fù)合物，其特征在于，所述直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的RNA水凝膠復(fù)合物，其特征在于，核酸適體為靶向MDA-MB-231細(xì)胞的核酸適體，其序列為SEQ ID No.5所示的核苷酸序列且5’端修飾有Fam基團(tuán)、3’端修飾有膽固醇；CpG片段為SEQ ID No.3所示核苷酸序列且5’端修飾有Fam基團(tuán)、3’端修飾有膽固醇。
8.權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的RNA水凝膠復(fù)合物的制備方法，其特征在于，首先設(shè)計(jì)直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板，直鏈DNA中設(shè)計(jì)了microRNA-182和microRNA-205的反義序列，通過(guò)滾環(huán)轉(zhuǎn)錄的方式形成純RNA體系的水凝膠載體，加入CpG片段、核酸適體和DOX，離心形成RNA三螺旋水凝膠，然后加入膠體MnO2@Ce6陽(yáng)離子納米粒子，得到磁性RNA水凝膠復(fù)合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的RNA水凝膠復(fù)合物的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：
(1)取直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板與T7啟動(dòng)子以相同濃度進(jìn)行退火處理；
(2)加入T4連接酶及T4連接酶緩沖液，19℃維持13h，形成RNA轉(zhuǎn)錄模板；
(3)加入T7聚合酶，rNTP，T7聚合酶緩沖液及TM緩沖液在37℃下維持5h，形成多副本的RNA水凝膠載體；
(4)將步驟(3)得到的RNA水凝膠載體、TM緩沖液、CpG片段及核酸適體在65℃下維持5min，緩慢降至25℃，在4℃冰箱中放置2h，37℃下與DOX混合2h后，高速離心，形成RNA三螺旋水凝膠；然后與膠體MnO2@Ce6陽(yáng)離子納米粒子常溫靜置15min，得到RNA水凝膠復(fù)合物。
10.權(quán)利要求1或2所述的RNA水凝膠載體或權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)所述的RNA水凝膠復(fù)合物在制備治療三陰性乳腺癌相關(guān)藥物中的應(yīng)用。
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