[發明專利]靶向三陰性乳腺癌的納米粒子摻雜RNA水凝膠的制備及應用

在審

• 申請號: 201910648136.6
• 申請日: 2019-07-18
• 公開（公告）號: CN110327464A
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發明（設計）人: 李雪梅;劉霄凡;丁來榮;張書圣
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00;A61K9/06;A61K31/704;A61K31/7088;A61K47/54;A61P35/00;A61P15/14
• 代理公司: 成都方圓聿聯專利代理事務所(普通合伙) 51241
• 代理人: 胡文莉

本發明公開了一種靶向三陰性乳腺癌的納米粒子摻雜RNA水凝膠的制備及應用，RNA水凝膠為純RNA體系，通過滾環轉錄的方式形成，該轉錄過程產生了大量的GC鍵，為DOX的引入提供了大量的位點，通過滾環復制產生的大量RNA副本結構是一個聚陰離子聚集體，鑒于其強的電負性，我們引入了具有正電性的MnO₂@Ce6納米粒子，聚陰離子水凝膠可以穩定膠體陽離子MnO₂@Ce6粒子，由此靶向進入乳腺癌細胞中協同治療。可用于藥物緩釋體系，生物相容性較好，對靶向性細胞MDA?MB?231腫瘤細胞的抑制生長作用及抑制癌癥轉移復發等領域具有廣闊前景。

技術領域

本發明涉及生物化學納米材料技術領域，具體涉及一種靶向三陰性乳腺癌的納米粒子摻雜RNA水凝膠的制備及應用，實現多重協同、增益治療三陰性乳腺癌。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的癌癥之一，三陰性乳腺癌(TNBCs)指的是乳腺癌的一種缺乏表達雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長因子受體2(HER2)類型。臨床研究證明TNBCs較其他類型的乳腺癌是最具侵略性的一種乳腺癌，其預后不良，死亡率和轉移傾向更為難以控制。傳統療法包括激素治療，靶向治療三個受體，但治療效果差強人意。因此，更有效的發展TNBCs診斷和聯合療法是緊迫和重要。

microRNA-205的異位表達可以減少體外細胞增殖，通過靶向抑制E2F1和LAMC1抑制體內腫瘤生長，其中E2F1是細胞周期調節因子，LAMC1是參與細胞粘附、增殖和遷移的細胞外基質相關。microRNA-182通過精確抑制Palladin蛋白的表達來影響細胞運動性和乳腺癌細胞的轉移。研究表明，microRNA在癌癥治療中具有統計學意義，但單個microRNA的預后效果并不理想。

二氧化錳可以與腫瘤微環境中內源的過氧化氫或谷胱甘肽分解產生氧氣，產生的錳離子可以輕易被排除體外，不會滯留在身體里影響機體健康，同時，產生的氧氣可用作于增強光動力治療，在進行光動力治療時，外源激光會促進DOX從水凝膠上卸載，短時間內就可以在細胞核內聚集，從而快速殺死腫瘤細胞。

核酸適體，是使用的廈門大學楊朝勇課題組通過篩選選出來的適體。與MDA-MB-231細胞表面受體特異性結合，從而實現靶向給藥。在后續實驗工作中作為對照組而構建的RNA基因納米探針，也具有一定的靶向治療作用。

膽固醇(Chol)，具有疏水性，可以促進RNA的轉錄副本形成納米結構，同時也增強了結構的穩定性。

目前亟需研究一種新興的僅由RNA分子自組裝的高效治療三陰性乳腺癌的水凝膠及其制備方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題為：提供一種僅由RNA分子自組裝的具有高效，毒副性較低，生物相容性較好等優點的水凝膠作為載體，攜帶多種治療性藥物靶向進入三陰性乳腺癌。

本發明的技術方案為：

用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA水凝膠載體，包括：

(1)由直鏈DNA轉錄模板通過滾環轉錄形成的RNA水凝膠，

(2)RNA水凝膠上具有治療型基因microRNA-182和microRNA-205。

進一步地，所述直鏈DNA轉錄模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。

RNA水凝膠載體的制備方法，首先設計直鏈DNA轉錄模板，直鏈DNA轉錄模板中設計了microRNA-182和microRNA-205的反義序列，通過滾環轉錄的方式形成純RNA體系的水凝膠載體。

進一步地，具體步驟如下：

(1)直鏈DNA轉錄模板與T7啟動子以相同濃度進行退火處理；