[發明專利]口蹄疫病毒定量檢測試紙卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201910646237.X
• 申請日: 2019-07-17
• 公開（公告）號: CN110297088A
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發明（設計）人: 蔣韜;林密;李昕;孫燕燕;李峰松;包艷芳;陳夏輝;楊光
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532;G01N33/558
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發明涉及口蹄疫病毒定量檢測試紙卡及其制備方法，屬于口蹄疫病毒快速檢測技術領域。本發明所述試紙卡包括卡殼、PVC襯板、吸收墊、硝酸纖維素膜、金標墊和樣品墊，所述金標墊上標有兔抗O型、A型或亞洲I型口蹄疫病毒抗體；所述硝酸纖維素膜上包被標有羊抗兔IgG抗體的質控帶和標有兔抗O型、A型或亞洲I型口蹄疫病毒抗體的檢測帶。本發明所述試紙卡能夠確定口蹄疫O型、A型或亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒及其含量，并且操作簡單快速，適合于疫苗質量的檢測與評價。

技術領域

本發明涉及口蹄疫病毒快速檢測技術領域，具體涉及口蹄疫病毒定量檢測試紙卡及其制備方法。

背景技術

口蹄疫(Foot andMouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄類動物共患的急性、熱性、接觸性傳染病。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3共7個血清型。雖然各型病毒引起的發病征候相同，但型間無交叉免疫，病后康復或免疫動物仍可感染其它血清型病毒而發病。因此，同一個地區可同時流行多個血清型的口蹄疫。口蹄疫主要危害豬牛羊等主要家畜畜種，可造成巨大的經濟損失。中國豬、牛、羊養殖量最大、鄰國眾多，診斷及防控口蹄疫不僅對本國農牧業發展起關鍵作用，而且對全球口蹄疫防控有重要意義。由于口蹄疫傳播迅速，難以防治，補救措施少，所以快速敏感的檢測技術對于及時采取措施、防控疫情蔓延至關重要。

疫苗免疫是防控口蹄疫的主要手段，口蹄疫滅活疫苗是目前使用的主要疫苗，在防控中發揮了重要作用。疫苗中的有效抗原，及完整病毒顆粒的含量，是口蹄疫滅活疫苗質量的關鍵。因此，口蹄疫滅活疫苗病毒含量的檢測，可以控制口蹄疫滅活疫苗的生產過程中的質量，比較各批次間疫苗的差異，評價疫苗半成品、成品質量，從而提高生產效率、改進生產工藝。給動物進行口蹄疫免疫接種時，往往不同廠家或不同批次間存在疫苗效價的差異，低效價疫苗易導致免疫失敗，因此，快速、準確測定口蹄疫病毒滅活疫苗中的病毒含量，對篩選有效的口蹄疫防疫疫苗具有實際的應用價值。在口蹄疫滅活疫苗免疫接種前，快速評價疫苗中的病毒含量，對免疫預防工作具有重要意義。

目前，檢測口蹄疫病毒的方法主要為病毒分離、血清學及分子生物學鑒定方法，這三類方法大多需要專業的技術或設備，或者檢測時間相對較長。口蹄疫病毒含量測定主要應用的方法主要為密度梯度法、凝膠過濾色譜法、ELISA、熒光定量RT-PCR等方法，蔗糖密度梯度離心法對FMDV的血清型毒株沒有限制，但無法檢測多價成品疫苗各血清型病毒的抗原含量；ELISA方法操作相對簡單，一次性可檢測大量樣品，但是制備單克隆抗體的過程復雜，并且對檢測的病毒株有限制；凝膠過濾色譜法則自動化程度高，但檢測靈敏度及對雜質含量較高的樣品分離效率目前不高，熒光定量RT-PCR往往由于試劑、操作等因素的影響會產生一些誤差，并且受研究技術水平的限制，絕對定量的精度和準確度不高。因此建立一種操作快速簡單，結果有效準確的口蹄疫病毒定量檢測方法具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供口蹄疫病毒定量檢測試紙卡及其制備方法。本發明所述試紙卡能夠確定口蹄疫O型、A型或亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒及其含量，并且操作簡單快速，適合于疫苗質量的檢測與評價。

本發明提供了口蹄疫病毒定量檢測試紙卡，優選的是，所述試紙卡檢測的樣品包括口蹄疫疫苗半成品、口蹄疫疫苗成品、含口蹄疫病毒的組織或含口蹄疫病毒的液體樣品。

優選的是，所述口蹄疫疫苗成品在檢測前進行破乳處理；所述含口蹄疫病毒的組織在檢測前進行分散處理；所述含口蹄疫病毒的液體樣品在檢測前進行離心，取上清。

優選的是，所述破乳處理為：將口蹄疫疫苗成品與破乳劑按照質量比為(4～5):1混合，振蕩后3000～5000rpm離心10～15min，取下層液體；

所述破乳劑為正丁醇、正戊醇或三氯乙烯。

優選的是，所述分散處理為：將含口蹄疫病毒的組織進行研磨，然后與分散劑按照質量比為1:5混合，4℃浸毒過夜，次日以3000～5000rpm離心5～10min，取上清；