[發明專利]口蹄疫病毒定量檢測試紙卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201910646237.X
• 申請日: 2019-07-17
• 公開（公告）號: CN110297088A
• 公開（公告）日: 2019-10-01
• 發明（設計）人: 蔣韜;林密;李昕;孫燕燕;李峰松;包艷芳;陳夏輝;楊光
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532;G01N33/558
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

1.口蹄疫病毒定量檢測試紙卡，所述試紙卡包括卡殼(1)、PVC襯板(2)、吸收墊(3)、硝酸纖維素膜(4)、金標墊(5)和樣品墊(6)，其特征在于，所述金標墊上標有兔抗O型、A型或亞洲I型口蹄疫病毒抗體；所述硝酸纖維素膜上包被標有羊抗兔IgG抗體的質控帶(7)和標有兔抗O型、A型或亞洲I型口蹄疫病毒抗體的檢測帶(8)。

2.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述試紙卡檢測的樣品包括口蹄疫疫苗半成品、口蹄疫疫苗成品、含口蹄疫病毒的組織或含口蹄疫病毒的液體樣品。

3.根據權利要求2所述的試紙卡，其特征在于，所述口蹄疫疫苗成品在檢測前進行破乳處理；所述含口蹄疫病毒的組織在檢測前進行分散處理；所述含口蹄疫病毒的液體樣品在檢測前進行離心，取上清。

4.根據權利要求3所述的試紙卡，其特征在于，所述破乳處理為：將口蹄疫疫苗成品與破乳劑按照質量比為(4～5):1混合，振蕩后3000～5000rpm離心10～15min，取下層液體；

所述破乳劑為正丁醇、正戊醇或三氯乙烯。

5.根據權利要求3所述的試紙卡，其特征在于，所述分散處理為：將含口蹄疫病毒的組織進行研磨，然后與分散劑按照質量比為1:5混合，4℃浸毒過夜，次日以3000～5000rpm離心5～10min，取上清；

所述分散劑為0.11mol/L磷酸鹽緩沖液或DMEM培養液。

6.權利要求1～5任一項所述口蹄疫病毒定量檢測試紙卡的制備方法，包括以下步驟：

1)調節膠體金溶液的pH至8.0～8.5，加終濃度為2～15μg/ml O型、A型或亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗體，攪拌30～40min，加入終濃度為0.5～1％的酪蛋白，攪拌30～40min，8000～10000rpm離心30～60min，棄去上清，所得沉淀復溶于膠體金溶液體積1/10～1/20的膠體金緩沖液中，得到免疫膠體金溶液，將所述免疫膠體金溶液進行噴涂，得到標有兔抗O型、A型或亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒抗體的金標墊；

2)使用磷酸鹽緩沖液，分別將羊抗兔IgG抗體作為質控帶抗體稀釋至0.2～1mg/mL，將標有兔抗O型、A型或亞洲I型口蹄疫病毒抗體作為檢測帶抗體稀釋至0.2～1mg/mL，分別按1～2μL/cm的噴量分別將質控帶抗體和檢測帶抗體噴于硝酸纖維素膜上，形成質控帶與檢測帶，37℃干燥后，置于封閉液中浸泡3～5min，取出后37℃干燥；

3)將試紙卡進行組裝；

所述步驟1)和步驟2)沒有時間先后順序的限定。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所述膠體金緩沖液為含質量百分含量為5～15％的海藻糖、質量百分含量為1％的酪蛋白和質量百分含量為0.5～1‰的NP-40的pH值為7.4、摩爾濃度為0.11mol/L的磷酸鹽緩沖液。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟2)所述封閉液為含質量百分含量為2.5～5％的牛血清白蛋白和質量百分含量為0.5～1‰NP-40的pH值為7.4，摩爾濃度為0.11mol/L的磷酸鹽緩沖液。