[發(fā)明專利]靶向PD-L1微泡的制備方法及在制備抑制宮頸癌的藥物上的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910636084.0 | 申請日： | 2019-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN110585127B | 公開（公告）日： | 2022-03-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 趙云;劉朝奇;馬瑤 | 申請（專利權(quán)）人： | 三峽大學(xué) |
| 主分類號： | A61K9/10 | 分類號： | A61K9/10;A61K39/395;A61K47/24;A61K47/68;A61P15/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 宜昌市三峽專利事務(wù)所 42103 | 代理人： | 成鋼 |
| 地址： | 443002 *** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 靶向 pd l1 制備 方法 抑制 宮頸癌 藥物 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明涉及一種靶向PD?L1微泡的制備方法，具體是將生物素化脂質(zhì)微泡滴加鏈酶親和素孵育，加入生物素化的PD?L1抗體，經(jīng)孵育后離心得到靶向PD?L1微泡。本發(fā)明將靶向PD?L1微泡應(yīng)用于制備抑制宮頸癌移植瘤的藥物上，實驗結(jié)果表明靶向PD?L1微泡具體更高的抑瘤效果，其中體積抑瘤率為39.21%，質(zhì)量抑瘤率為44.44%。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)微泡，具體為靶向PD-L1微泡，并將其應(yīng)用于制備治療宮頸癌。
背景技術(shù)
宮頸癌是全世界女性最常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌高居婦科惡性腫瘤第二位，發(fā)病率高且逐漸趨于年輕化，嚴(yán)重危害女性健康。宮頸癌主要是由于人乳頭瘤病毒(HPV)感染造成，目前認(rèn)為高危型HPV持續(xù)感染、機(jī)體的免疫功能下降及宮頸癌局部微環(huán)境之間的相互作用，促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。當(dāng)前治療方法包括手術(shù)切除、放療、化療。手術(shù)是治療宮頸癌的主要方法之一，雖然手術(shù)能暫時切除病灶，但腫瘤細(xì)胞具有很強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，病灶并不能完全切除。輔助化療在臨床上被廣泛用于術(shù)前和術(shù)后治療，能夠有效地降低腫瘤分期、減少宮旁浸潤，為手術(shù)提供了良好的條件，但化療的靶向性差，易產(chǎn)生耐藥，全身毒副作用明顯。宮頸癌是放射敏感性腫瘤，放療對于中晚期患者和復(fù)發(fā)患者的效果是得到肯定的，但其嚴(yán)重的并發(fā)癥給治療帶來極大的困難。因此探索宮頸癌的發(fā)病機(jī)制，尋找宮頸癌治療的新靶點，對宮頸癌的早期診斷、治療及預(yù)后評估具有重要的臨床意義。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種靶向PD-L1微泡，并將其應(yīng)用于制備抑制宮頸癌移植瘤的藥物。進(jìn)一步優(yōu)選方案中，應(yīng)用于制備抑制U14宮頸癌細(xì)胞的藥物。
所述的靶向PD-L1微泡是通過薄膜水化法及機(jī)械震蕩法制備的生物素化脂質(zhì)微泡，具體步驟包括如下：
(1)將二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素(DSPE-PEG2000-Biotin)、硬脂酸—聚乙酰亞胺(PEI-600)混于玻璃試管中，60℃水浴鍋預(yù)熱后，渦旋狀態(tài)下充入氮?dú)馐够旌弦撼赡び谠嚬鼙冢?二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素(DSPE-PEG2000-Biotin)、硬脂酸—聚乙酰亞胺(PEI-600)，均為美國Avanti公司購買)。
二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亞胺摩爾比75-90:3-6:3-6:2-6。
優(yōu)選方案中二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亞胺摩爾比85:5:5:5。
(2)將步驟(1)中成膜后的玻璃管抽真空(抽真空3h以上，使液體充分揮發(fā))后，加入Tris緩沖液，水浴超聲(使玻璃管壁上的薄膜充分溶解于Tris緩沖液中，液體澄清后停止水浴超聲)后置于西林瓶中密封，沖入C3F8氣體，冷藏保存；
(3)將步驟(2)中冷藏后的西林瓶經(jīng)振蕩后得到白色乳狀液體(一般震蕩25-30s)；將該白色乳狀液體移經(jīng)離心(在1000rpm的離心速度下離心3min)后棄去下層液體即為生物素化脂質(zhì)微泡(下層液體為游離的脂質(zhì)和雜質(zhì))；
(4)向步驟(3)中生物素化脂質(zhì)微泡滴加鏈酶親和素(美國Avanti公司購買)，在2-4℃、避光下恒溫振蕩孵育，得到微泡混懸液；
(5)將步驟(4)中的微泡混懸液離心(在1000rpm的離心速度下離心3min)后，棄去下清液(以除去游離的鏈酶親和素)后，采用PBS緩沖液漂洗、離心、棄下清(優(yōu)選方案為重復(fù)PBS緩沖液漂洗、離心、棄下清的步驟3次)，得到微泡；
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