[發明專利]靶向PD-L1微泡的制備方法及在制備抑制宮頸癌的藥物上的應用有效
| 申請號： | 201910636084.0 | 申請日： | 2019-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN110585127B | 公開（公告）日： | 2022-03-08 |
| 發明（設計）人： | 趙云;劉朝奇;馬瑤 | 申請（專利權）人： | 三峽大學 |
| 主分類號： | A61K9/10 | 分類號： | A61K9/10;A61K39/395;A61K47/24;A61K47/68;A61P15/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 宜昌市三峽專利事務所 42103 | 代理人： | 成鋼 |
| 地址： | 443002 *** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 靶向 pd l1 制備 方法 抑制 宮頸癌 藥物 應用 | ||
1.靶向PD-L1微泡在制備抑制宮頸癌移植瘤的藥物上的應用，其特征在于，靶向PD-L1微泡的制備方法，包括如下步驟：
（1）二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸-聚乙酰亞胺混于玻璃試管中，50-60℃水浴鍋預熱后，渦旋狀態下充入氮氣使混合液成膜于試管壁；
（2）將步驟（1）中成膜后的玻璃管抽真空后，加入Tris緩沖液，水浴超聲后置于西林瓶中密封，沖入C3F8氣體，冷藏保存；
（3）將步驟（2）中冷藏后的西林瓶經振蕩后得到白色乳狀液體；將該白色乳狀液體移經離心后棄去下層液體即為生物素化脂質微泡；
（4）向步驟（3）中生物素化脂質微泡中滴加鏈酶親和素，在2-4℃、避光下恒溫振蕩孵育，得到微泡混懸液；
（5）將步驟（4）中的微泡混懸液離心后，棄去下清液后，采用PBS緩沖液漂洗、離心、棄下清，得到微泡；
（6）將生物素化的PD-L1抗體加入步驟（5）的微泡中，在2-4℃、避光的恒溫振蕩孵育過夜后離心，棄下清液，加入PBS緩沖液漂洗、離心、棄下清，即可得到靶向PD-L1微泡。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亞胺摩爾比75-90:3-6:3-6:2-6。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，二硬脂酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-生物素、硬脂酸—聚乙酰亞胺摩爾比85:5:5:5。
4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，鏈酶親和素的加入量相對于生物素化脂質微泡的加入量過量；生物素化的PD-L1抗體的加入量相對于微泡的加入量過量。
5.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的靶向PD-L1微泡在制備抑制U14宮頸癌細胞的藥物上的應用。
6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的靶向PD-L1微泡的濃度為1×107-1.5×109個/ml。
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