[發明專利]一種貝類高F值寡肽的制備方法

有效

• 申請號: 201910634784.6
• 申請日: 2019-07-15
• 公開（公告）號: CN110144377B
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 趙芹;劉海梅;張滿;溫丑玉;徐瑞彬;張彩麗;李海燕;牛麗紅;張莉莉;于慧
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/14;C08F290/06;C08F220/06;C08F2/48;C08G73/02;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30
• 代理公司: 煙臺上禾知識產權代理事務所(普通合伙) 37234
• 代理人: 劉志毅

本發明公開了一種貝類高F值寡肽的制備方法，包括以下步驟：將貝肉洗凈后勻漿，然后進行酶解，獲取上層酶解液。以樹枝狀聚合物制備分子印跡材料，吸附酶解液中的芳香族氨基酸，得到高F值寡肽溶液，采用冷凍干燥制備高F值寡肽粉末。本發明產品原料易得且廉價，制備方法簡單，便于工業化生產，產品得率75%以上，F值50以上，可作為肝病病人的膳食來源成分。

技術領域

本發明涉及生物肽制備領域，具體涉及一種貝類高F值寡肽的制備方法。

背景技術

高F 值寡肽是蛋白酶作用于食物蛋白質后形成的一種低分子量生理活性肽,由支鏈氨基酸含量高和芳香族氨基酸含量低的特殊氨基酸組成。F 值（Fischer ratio），是支鏈氨基酸與芳香族氨基酸含量的摩爾數比值。一般認為，用于臨床治療肝性腦病的高F 值寡肽的F 值應大于20。

正常人的血液中F 值為3.0-3.5，而患有肝臟疾病病人的F 值只有1.0 或者更低。對于肝病患者來說，其血漿F 值可以反映出患者肝病的嚴重程度。高F 值寡肽可用于防止肝性腦病的發生或減緩其癥狀，同時又改善病人的營養狀況。高F 值寡肽還具有提供能量、抗疲勞、改善手術后和臥床病人的蛋白營養狀況、治療苯丙酮尿癥的作用，在醫藥與臨床營養方面受到廣泛關注。

酶解法制備的高F值寡肽混合液含有大量游離芳香族氨基酸，對寡肽液進行脫芳處理，才能提高寡肽的F值。目前常用的高F值化方法主要有吸附法和過濾分離法。國內高F值化處理主要采用活性炭吸附法，該方法成本低，非常適合工業化應用，但是活性炭對芳香族氨基酸的吸附不具有特異性，不僅可以脫除芳香族氨基酸，也會吸附包含支鏈氨基酸在內的其它氨基酸，難以達到理想的吸附效果，對F值的提升效果不理想且不穩定，對原料及酶解工藝要求較高。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，對吸附法脫芳處理進行了改進，制備了分子印跡聚合物作為芳香族氨基酸吸附劑，具體發明內容如下：

一種貝類高F值寡肽的制備方法，其步驟包括蛋白酶解、芳香族氨基酸專一吸附劑制備、芳香族氨基酸脫除，所述芳香族氨基酸專一吸附劑為分子印跡聚合物。

優選的，所述芳香族氨基酸脫除包括如下步驟：

向所述蛋白酶解后的產物中添加其1-5wt%分子印跡聚合物，10-20℃攪拌30-100min， 4000-10000r/min離心5-30min，收集上清液，獲得高F值寡肽溶液。

優選的，所述分子印跡聚合物由樹枝化聚酰胺-胺制備而成。

進一步，所述分子印跡聚合物，其制備方法包括如下步驟：

(1)0.5代樹枝狀聚酰胺-胺制備：以乙二胺為核，進行Michael加成反應，制備0.5代樹枝狀聚酰胺-胺；

(2)1代樹枝狀聚酰胺-胺制備：以0.5代樹枝狀聚酰胺-胺和乙二胺進行酰胺化縮合反應制備1代樹枝狀聚酰胺-胺；

(3)2代樹枝狀聚酰胺-胺制備：對步驟(2)獲得的1代樹枝狀聚酰胺-胺重復進行步驟(2)中的Michael加成和步驟(2)中的酰胺化縮合反應，制備2代樹枝狀聚酰胺-胺；

(4)端雙鍵樹枝狀聚合物的制備： 由2代樹枝狀聚酰胺-胺和丙烯酰氯進行胺解反應即得到端雙鍵樹枝狀聚酰胺-胺;

(5)分子印跡聚合物合成：以芳香族氨基酸作為模板，與步驟(4)中獲得的端雙鍵樹枝狀聚酰胺-胺合成，即得分子印跡聚合物。