[發(fā)明專利]一種貝類高F值寡肽的制備方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910634784.6 | 申請(qǐng)日： | 2019-07-15 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110144377B | 公開（公告）日： | 2019-10-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 趙芹;劉海梅;張滿;溫丑玉;徐瑞彬;張彩麗;李海燕;牛麗紅;張莉莉;于慧 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 魯東大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12P21/06 | 分類號(hào)： | C12P21/06;C07K1/14;C08F290/06;C08F220/06;C08F2/48;C08G73/02;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30 |
| 代理公司： | 煙臺(tái)上禾知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37234 | 代理人： | 劉志毅 |
| 地址： | 264025 山東*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 制備 高F值寡肽 酶解液 貝類 芳香族氨基酸 分子印跡材料 樹枝狀聚合物 產(chǎn)品原料 膳食來(lái)源 貝肉 得率 酶解 吸附 洗凈 勻漿 肝病 上層 | ||
1.一種貝類高F值寡肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括蛋白酶解、芳香族氨基酸專一吸附劑制備、芳香族氨基酸脫除，所述芳香族氨基酸專一吸附劑為分子印跡聚合物；
所述蛋白酶解包括如下步驟：
(1)取新鮮貝肉洗凈，按照貝肉與水的質(zhì)量比1：5-1：10加水勻漿，得到漿料；
(2)向步驟(1)得到的漿料中加入內(nèi)切蛋白酶，酶解條件為：酶添加量為占漿料總質(zhì)量1000-3000U/g，pH 5-8，酶解溫度 30-50℃，酶解時(shí)間 5-10 h，然后煮沸5-15min滅酶，得到酶解液；
(3)向步驟(2)獲得的酶解液中，加入外切蛋白酶，酶解條件為：酶添加量為占漿料總質(zhì)量1000-2000U/g，pH 5-8、酶解溫度 30-55℃，酶解時(shí)間 8-12 h，然后煮沸5-15min滅酶，3000-8000r/min離心5-30min，收集上清液，得到貝類寡肽溶液；
所述分子印跡聚合物的制備方法包括如下步驟：
(1)0.5代樹枝狀聚酰胺-胺制備：以乙二胺為核，進(jìn)行Michael加成反應(yīng)，制備0.5代樹枝狀聚酰胺-胺；
(2)1代樹枝狀聚酰胺-胺制備：以0.5代樹枝狀聚酰胺-胺和乙二胺進(jìn)行酰胺化縮合反應(yīng)制備1代樹枝狀聚酰胺-胺；
(3)2代樹枝狀聚酰胺-胺制備：對(duì)步驟(2)獲得的1代樹枝狀聚酰胺-胺重復(fù)進(jìn)行步驟(1)中的Michael加成和步驟(2)中的酰胺化縮合反應(yīng)，制備2代樹枝狀聚酰胺-胺；
(4)端雙鍵樹枝狀聚合物的制備： 由2代樹枝狀聚酰胺-胺和丙烯酰氯進(jìn)行胺解反應(yīng)即得到端雙鍵樹枝狀聚酰胺-胺;
(5)分子印跡聚合物合成：以芳香族氨基酸作為模板，與步驟(4)中獲得的端雙鍵樹枝狀聚酰胺-胺合成，即得分子印跡聚合物；
所述芳香族氨基酸脫除包括如下步驟：
向所述蛋白酶解后的產(chǎn)物中添加其1-5wt%分子印跡聚合物，10-20℃攪拌30-100min，4000-10000r/min離心5-30min，收集上清液，獲得高F值寡肽溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類高F值寡肽的制備方法，其特征在于，所述分子印跡聚合物的制備方法中步驟(1)的Michael加成反應(yīng)，其工作條件為：將9份乙二胺和32 份甲醇加入到帶有磁力攪拌子、回流冷凝管和溫度計(jì)的三口燒瓶中,15-30℃ 通氮?dú)?-20 min除氧，攪拌條件下，滴加103.2 份丙烯酸甲酯，反應(yīng)10-30 h，在20-35 ℃,100-200 Pa的壓力下減壓蒸餾，除去溶劑甲醇和過量的丙烯酸甲酯，得0.5代樹枝狀聚酰胺-胺；
所述分子印跡聚合物的制備方法中步驟(2)的酰胺化縮合反應(yīng)，其工作條件為：將20.2份 步驟(1)中獲得的0.5代樹枝狀聚酰胺-胺和64 份甲醇混合，15-30℃ 攪拌條件下,滴加72 份乙二胺,反應(yīng)10-30 h，在45-75℃,100-300 Pa 的壓力下減壓蒸餾,除去溶劑甲醇和乙二胺，得到1.0代樹枝狀聚酰胺-胺；
所述分子印跡聚合物的制備方法中步驟(4)的工作條件為：稱取1份2代樹枝狀聚酰胺-胺和8-16份丙烯酰氯，用二氯甲烷溶解，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，避光2-4℃反應(yīng)1-3h，得到具有沉淀物的溶液，低溫過濾，得到端雙鍵樹枝狀聚酰胺-胺產(chǎn)物；
所述分子印跡聚合物的制備方法中步驟(5)的工作條件為：稱取1份芳香族氨基酸作為模板分子，加入5-10份乙醇，滴加50-200 μL 37wt%的鹽酸使模板分子全部溶解；加入3-8mmo1步驟(4)中獲得的端雙鍵樹枝狀聚酰胺-胺，溶解，于冰水浴中作用5-10h后加入功能單體與引發(fā)劑，超聲混合均勻，充氮?dú)?-15min，然后置于冰水浴中進(jìn)行紫外光引發(fā)聚合；聚合完成后將所得產(chǎn)物粉碎、研磨，用甲醇和乙酸除去模板分子，真空干燥后備用；所述功能單體為甲基丙烯酸，所述引發(fā)劑為偶氮二異丁腈。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的貝類高F值寡肽的制備方法，其特征在于，所述芳香族氨基酸為酪氨酸、色氨酸或苯丙氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類高F值寡肽的制備方法，其特征在于，所述貝類為櫛孔扇貝、蝦夷扇貝或海灣扇貝。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類高F值寡肽的制備方法，其特征在于，所述高F值寡肽的F值為50以上。
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