[發(fā)明專利]一種固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910634009.0
• 申請日: 2019-07-15
• 公開（公告）號: CN110373406B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 步國建;甘李;張玉如;寇雪蕊;和超楠;劉艷;賀曉潔
• 申請（專利權(quán)）人: 泰興市東圣生物科技有限公司;江蘇東匯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/02;C12N9/96;C12N9/10
• 代理公司: 上海德禾翰通律師事務(wù)所 31319
• 代理人: 夏思秋

1.一種固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的制備方法，其特征在于，所述方法為，利用固定化和浸入保護劑復(fù)合方法制備得到所述固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，包括如下步驟：

1)將含有葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、卡拉膠、明膠的天然高分子化合物中的一種或多種制備成載體懸浮液，加熱融化滅菌；

2)將滅好菌的所述載體懸浮液冷卻至室溫，加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH后，與游離態(tài)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶混合均勻，于2-8℃的條件下靜置；

3)然后加入戊二醛溶液，固定化交聯(lián)，然后去離子水洗滌，得到固定化體系；所述交聯(lián)的時間為10-60min；

4)將所述步驟3)得到的固定化體系浸入保護劑中，制備得到所述固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶；所述保護劑為包含13.3％蔗糖，13.3％葡萄糖中的任意一種或兩種的糖類、13.3％山梨糖醇，33.3％丙三醇中的任意一種或兩種的醇類、以及0.1％，0.2％，0.4％亞硫酸鈉，0.2％，0.4％還原型谷胱甘肽，0.2％L-半胱氨酸及鹽中的任意一種或多種的抗氧化劑的液態(tài)混合物；

所制備得到的固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的終濃度為100-200U/mL。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中，所述pH調(diào)節(jié)劑為硫酸、乳酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、鹽酸、Tris、檸檬酸、檸檬酸三鈉、純水中的任意一種或多種；所述pH值為5.0-7.0。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟2)中，所述游離態(tài)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的初始濃度為500-1000U/mL；所述靜置的時間為10-60min。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟3)中，所述洗滌的次數(shù)為2-5次；所述戊二醛溶液的濃度m/V為0.05-2.00％。

5.如權(quán)利要求1-4之任一項所述方法制備得到的固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，其特征在于，所述固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶于50℃的環(huán)境下保存3天后酶活剩余率不低于90％，或于40℃的環(huán)境中保存2周后酶活剩余率不低于90％，或于室溫25℃的環(huán)境中保存6個月后酶活剩余率不低于92％，或于室溫25℃的環(huán)境中保存8個月后酶活剩余率不低于90％。

6.如權(quán)利要求5所述的固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，其特征在于，所述固定化谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的理化特性如下：pH＝5.00-7.00，水分活度＝0.7-1.0，電導(dǎo)率＝0-3mS/cm，氧化還原電位＝0-500mV。