[發明專利]一種提取鮑肝胰腺RNA的方法

有效

• 申請號: 201910633245.0
• 申請日: 2019-07-15
• 公開（公告）號: CN110295164B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發明（設計）人: 姚托;盧潔;葉靈通;王江勇
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院南海水產研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣州正明知識產權代理事務所(普通合伙) 44572
• 代理人: 余敏

1.一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、取鮑肝胰腺，在液氮中磨碎后，轉入含有Trizol的RNase-free EP管中，混勻后離心，取上清液轉入新的RNase-free EP管中；

S2、往步驟S1的上清液中加入1/5上清液體積的氯仿，混勻充分乳化呈乳白色，室溫靜置2-5 min，離心后取上清液轉入新的RNase-free EP管中；

S3、往步驟S2的上清液中分別加入與上清液等體積的異丙醇和5 mol/L NaCl，混勻，將得到的溶液和沉淀一起轉入RNA吸附柱中，離心后棄掉收集管中的液體；

S4、往步驟S3的RNA吸附柱中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl，室溫靜置2-5 min，離心后棄掉液體；

S5、往步驟S4的RNA吸附柱中加入75%乙醇，室溫靜置2-5 min，離心后棄掉液體；

S6、將步驟S5的RNA吸附柱放入2 mL收集管中，離心2-3 min；

S7、將步驟S6的RNA吸附柱充分晾干；

S8、將步驟S7的RNA吸附柱轉入一個新的無RNase的1.5 mL離心管中，加入RNase-free水，室溫放置2-5 min，離心后得到鮑肝胰腺總RNA；

S9、往步驟S8的離心管中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl進行二次沉淀，充分混合后靜置2-5 min，將混合物轉入RNA吸附柱中，離心后棄掉收集管中的液體；

S10、重復步驟S5-S8，最終得到高質量的鮑肝胰腺總RNA。

2.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，所述鮑肝胰腺的用量為50-70 mg。

3.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S1中所述Trizol的用量為1 mL。

4.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S4、S9中所述的75%乙醇和5mol/L NaCl的添加量均為300 μL。

5.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S4和步驟S5的整個操作均重復1次。

6.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S5中所述的75%乙醇的添加量為500-600 μL。

7.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，在步驟S7中，將步驟S6的RNA吸附柱在室溫下放置5-10 min，或者置于超凈工作臺通風3-5 min，以充分晾干。

8.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S8中所述的RNase-free水的添加量為30-100 μL。

9.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S1中所述的離心為4 ℃、12000 rpm離心5 min，步驟S2中所述的離心為4 ℃、12000 rpm離心10 min，步驟S3、S4、S5、S9中所述的離心均為4 ℃ 、12000 rpm離心30 s，步驟S6、S8中所述的離心為4℃、12000 rpm離心2 min。

10.根據權利要求1所述的一種提取鮑肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步驟S10中，步驟S5-S8重復1次。